MolPure^® Endo-free Plasmid Mini Kit 適用于從 1-10 mL 大腸桿菌LB培養液中快速提取20-50 µg純凈的質粒DNA，具有高效、快速、方便等特點。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料，配合本公司獨特的裂解液配方可以最大限度的回收高純度DNA。提取的DNA純度高，內毒素殘留極低(<0.1EU/μg DNA)，細胞轉染效果極佳，也可直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。

穩定性好：離心吸附柱內硅基質膜全部采用特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。

快速、方便：30 min可從1.5-5 ml大腸桿菌LB（Luria-Bertani）培養液中，可快速提取多達20-50 µg純凈的高拷貝質粒DNA。

純凈：獨特工藝配方清除內毒素，內毒素含量極低（<0.1 EU/μg DNA），細胞轉染效果極佳。

圖 分別使用19021、O品牌、T品牌的試劑提取質粒。之后293細胞，分別瞬轉O品牌、Yeasen、T品牌抽提的pEGFP-C1質粒，72h觀察熒光。

結果表明轉染效率Yeasen＞T品牌＞O品牌

Part I組分-15~-25℃保存；Part II組分2~8℃保存；Part III組分室溫保存。有效期2年。

Q：加入去內毒素試劑后，溶液沒有變得渾濁？

A：可能是本身內毒素低，也可能是加入 ER 溶液后，因為體系的 PH 差異、抑制物等，使得內毒素的凝集狀態反應不一樣。

Q：無內毒素質粒小提檢測濃度很高？

A：客戶的菌液量用了 20ml，太多了，導致 RNase 作用不足。

Q: 質粒濃度低

A: （1）拷貝數低或者大于10kb的質粒應加大菌體使用量，并按比例增加后續buffer的用量；（2）細菌可能沒有充分裂解。

Q: 裂解液有沉淀

A: 裂解液中含有NaOH，可能鹽離子析出，可 37℃溫浴復溶至溶液澄清再使用。 ?

Q：質粒跑膠出現小于100bp小條帶

A：可能RNA未去除干凈（樣本太多或者添加了RNase的緩沖液 RS酶活下降）或者裂解時間太長導致質粒受到破壞。

Q: 內毒素清除離心后分層不徹底

A: 提升離心溫度；加大離心轉速；增加離心時間。

Q: 提取的產量低

A: 中低拷貝質粒：長片段、表達型載體常以低拷貝為主，建議加大菌體使用量，菌液過夜培養；

菌種問題：菌種保存中質粒丟失，養菌前先劃線活化，穩定產量；

菌體未充分裂解：在buffer種充分重懸，避免成團；

試劑準備有誤：有沉淀析出的溶液需要加熱；加入的乙醇體積不準；

洗脫不充分：洗脫液預熱，二次洗脫。

Q: 有基因組污染

A: 培養時間太長：培養時間建議控制在12-16h；裂解不充分。

Q: 下游結果不理想

A: 鹽離子污染；乙醇污染；質粒降解；層析柱膜脫落。

[1] Han P, Cao P, Yue J, et al. Knockdown of hnRNPA1 Promotes NSCLC Metastasis and EMT by Regulating Alternative Splicing of LAS1L exon 9. Front Oncol. 2022;12:837248. Published 2022 Jun 23. doi:10.3389/fonc.2022.837248(IF:5.738)
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