BJ5183-AD-1感受態細胞

保存條件：-80℃。

1．產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌BJ5183菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，有助于重組DNA的穩定和高純度DNA的提取，是目前腺病毒系統最常用的感受態細胞。

基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]

特點：1．BJ5183-AD-1攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株，具有較高重組活力，有利于轉入的目的基因與腺病毒質粒的重組。2．endA1（缺失核酸內切酶）的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。3．BJ5183-AD-1菌株細胞中已經提前轉入了腺病毒質粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，賦予該菌株氨芐抗性，在病毒質粒構建時，只需轉入線性化的目的質粒即可，簡化了實驗步驟，提高了病毒質粒重組概率。其具鏈霉素抗性，氨芐抗性。pCAMBIA2301質粒(size:1163bp)檢測，轉化效率可達105?cfu/μgDNA。

2．使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，?37℃培養12~16h。

3．注意事項：

1．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2．BJ5183-AD-1菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后，可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴繁，純化質粒。

*本試劑僅供實驗室研究使用