細(xì)胞核提取試劑盒
產(chǎn)品名稱： 細(xì)胞核提取試劑盒
英文名稱： The nucleus extraction kit
產(chǎn)品編號： SN0020-50
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國/北京
品牌商標(biāo)： Solarbio
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 :
- 地址 : 北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷景盛南四街85A三層
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- 所在區(qū)域 : 北京
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細(xì)胞核提取試劑盒
產(chǎn)品簡介：
細(xì)胞核提取試劑盒用于從動物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。 適合于動物軟組織 （肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。
詳細(xì)信息：
供應(yīng)商：Solarbio實(shí)驗(yàn)室
產(chǎn)品貨號：SN0020??
產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T
保存：短期使用可 4℃儲存，長期保存請置于-20℃或-70℃。
產(chǎn)品內(nèi)容：
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細(xì)胞核提取試劑盒操作步驟：
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取 100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入 1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入 50ulLReagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織 20 次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心 5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要 5 ×10 7 個細(xì)胞，加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入 50ul Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞 20~30 次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到 1.5ml離心管中，4℃，700g 離心 5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入 0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。
3. 取另一新離心管內(nèi)加入 0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心 5min。細(xì)胞核沉淀在管底。
4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入 0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心 10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。
5. 用 50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。
細(xì)胞核提取試劑盒使用注意事項(xiàng)：
1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。
轉(zhuǎn)速與離心力換算:
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm] 2
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；
[rpm] 2 即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。
相關(guān)產(chǎn)品：
P1020 ????1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
SM0020???線粒體提取試劑盒??solarbio ??50T/100T
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