質(zhì)粒提取試劑盒
產(chǎn)品名稱： 質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品編號： D6942-100
產(chǎn)品價格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國/Omega
品牌商標： 中國/Omega
更新時間： null
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 :
- 地址 : 北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷景盛南四街85A三層
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 北京
- 電話 : 010-563*1250 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : 2748554845@qq.com
質(zhì)粒小量提取試劑盒說明書
貨號：D1100
規(guī)格：50T/100T
保存：常溫保存，復檢期一年。
試劑盒內(nèi)容：
|
試劑盒組成 |
D1100-50T |
D1100-100T |
|
RNase?A |
300ul |
500ul |
|
溶液Ⅰ |
15ml |
30ml |
|
溶液Ⅱ |
15ml |
30ml |
|
溶液Ⅲ |
20ml |
40ml |
|
漂洗液 |
15ml |
15ml×2 |
|
洗脫液 |
15ml |
30ml |
|
吸附柱 |
50個 |
100個 |
|
收集管 |
50個 |
100個 |
|
說明書 |
1份 |
1份 |
產(chǎn)品說明：
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。?離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。?使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的?RNaseA?全部加入），混勻，置于?2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。?
操作步驟:
1、取1-5ml細菌培養(yǎng)物，12000rpm離心1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細菌基因組DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過5?min，以免質(zhì)粒受到破壞。
4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10?min，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置2min，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置2min，12000rpm離心1min。
10、為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min。
注意事項:
1、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。
2、洗脫緩沖液體積不應少于50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.?0會降低洗脫效率，DNA產(chǎn)物應保存在-20℃，以防DNA降解。
3、 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒，應加大菌體使用量，使用5-10ml過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率。
4、DNA濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。?DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA、?40ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。?
相關(guān)產(chǎn)品：
E1020 EB染色液
D1010 6×DNA?Loading?Buffer
T1060 50×TAE?緩沖液
T1050 5×TBE?緩沖液
M1070 D2000?plus?DNA?Ladder
M1400 1kb?DNA?Ladder
G8142 GoldView?II型核酸染色劑(5000×)
?
TUNEology 波長可調(diào)檢測卡盒-->