XL10-Gold感受態細胞

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1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌XL10-Gold菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，特異性用于大質?；蛘滟F連接產物轉化或構建文庫的超級感受態細胞。

基因型：TetrΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F′proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]

特點：1.XL10-Gold是目前轉化效率最高的感受態細胞。是特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型性，多用于文庫構建，已成功應用于40kd質粒的構建。2. [Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統；同時缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量。3.hsdSMR突變導致EcoK核酸內切酶系統缺失，增強了外源DNA的穩定性和提取質量。4. 重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性。此菌株具有四環素（Tetr）和氯霉素（Camr）抗性。5. lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選pUC19質粒檢測，轉化效率可達109 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養， 37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰上融化。

2．混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

4．此 XL10-Gold菌株對<40 μg/ml氯霉素有抗性，但對100 μg/ml氯霉素敏感。

*本試劑僅供實驗室研究使用