基本原理：

本試劑盒利用抗體和R-PE上游離的氨基，采用定向對接偶聯技術將抗體分子與R-PE共價偶聯，本試劑盒采用加長臂方案，使被標記抗體與熒光蛋白之間有一定長度柔性連接臂，避免由于位阻妨礙抗體活性或者熒光蛋白發光效率。

主要特點：

ü??試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進行便可得到高品質R-PE偶聯抗體；

ü??本試劑盒所配置的R-PE為高純度，高活性熒光蛋白，熒光發光效率更高；

ü??本試劑采用定向偶聯技術，熒光蛋白和抗體都不會發生自連，保證偶聯物的特異性和均一性；

ü??試劑盒所使用的交聯劑增加了延長臂，確保不會因為蛋白質位阻而影響發光效率；

ü??鑒于R-PE的蛋白骨架特性，其抗淬滅能力更強。

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試劑盒已經提供材料：

ü??R-PE蛋白凍干粉? ? ? 1mg*1支? 可用于標記300-500ug抗體

ü??R-PE蛋白活化試劑? ? 2mg*1支? 使用前加ddH2O 200ul

ü??修飾反應液? ? ? ? 30ml*1瓶

ü??標記緩沖液? ? ? ? 30ml*1瓶

ü??抗體修飾試劑干粉? ? 2mg*1支 使用前加1000ul ddH2O

ü??30KMWCO超濾管? ? ? 3支

ü??封閉試劑? ? ? ? ?1支 使用前加DMSO 5ul

ü??DMSO溶劑? ? ? ? ?200ul*1支

ü??說明書? ? ? ? ? 1份

其他需要自備試劑材料：

2??待標記的生物分子；

2??移液器及吸頭；

2??去離子水。

試劑盒儲存

試劑盒抗體修飾試劑、R-PE蛋白活化試劑和封閉試劑，放在-20?C，其余組分放在2-8℃可保存6個月以上。

試劑盒操作流程：

1a.抗體的修飾?與1b.R-PE的活化兩個步驟同時進行

1a.抗體的修飾

1）抗體修飾試劑干粉溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗體修飾試劑液。

2）取待標記抗體（純度>90%），用修飾反應液調整濃度到 5mg/ml左右，按照每mg抗體加入5μl抗體修飾試劑液，輕輕混勻，在室溫下攪拌反應 60-90分鐘。

3）反應完成后，轉移到超濾管內芯，并添加標記緩沖液，通過超濾管多次離心置換溶液去除多余抗體修飾試劑，超濾管內芯收集液為修飾抗體，并調節濃度至 3mg/ml。

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1b.R-PE蛋白的活化

1）取1支R-PE蛋白凍干粉用標記緩沖液重懸到5mg/ml濃度R-PE蛋白溶液；

2）將R-PE蛋白活化試劑溶解于ddH2O，配制成5mg/ml?R-PE蛋白活化試劑溶液，按照每mg?R-PE蛋白加入100ul的比例加入到R-PE蛋白溶液，室溫避光反應2小時；

3）反應完畢，轉移到超濾管內芯，通過超濾管離心4次，每次120，00rpm 5min,置換為標記緩沖液,以去除游離的R-PE蛋白活化試劑，濾芯內溶液即為活化R-PE蛋白。

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2.活化R-PE蛋白與抗體偶聯

1）活化R-PE蛋白濃度調整為5mg/ml；

2）將修飾抗體與活化R-PE蛋白，按照質量比1:3比例（每mg修飾抗體對應3mg活化R-PE蛋白）混合，室溫避光反應2小時；

3）將封閉試劑管中加入5ul DMSO配成封閉試劑液，按照每0.5mg抗體5ul的體積封閉試劑液加入步驟2）反應產物中，封閉未反應完的活性基團；

4）將步驟3)溶液加入超濾管通過反復離心置換標記緩沖液，去除封閉試劑等；

5）標記好的抗體分裝，加入適當保護劑，-20℃保存備用。