細胞內鈣通量測定是一種廣泛使用的監測GPCR和鈣通道活性的方法。為了量化細胞內鈣濃度，比率熒光鈣指示劑是優選的，因為該比例與鈣濃度直接相關并且與細胞數量和染料負載濃度無關。然而，流行的比率鈣指示劑（例如Fura-2和Indo-1）具有某些限制，例如較低的靈敏度，UV激發，并且與HTS篩選過濾器組不兼容。

Cal Red R525 / 650已被開發為新的488 nm可激發的比率熒光鈣指示劑。Cal Red R525 / 650是弱熒光的，一旦進入細胞，親脂性AM阻斷基團被細胞內酯酶切割，導致帶負電的熒光染料在細胞中保持良好，激發接近488nm，兩次發射在525nm和650nm。當用生物活性化合物刺激細胞時，該受體啟動細胞內鈣的釋放，其被Cal Red R525 / 650螯合。當在488nm激發時，發射信號在525nm處增加并在650nm處減小。Cal Red R525 / 650的激發和發射波長與普通濾光片組兼容，對細胞的損傷小，使其成為評估和篩選GPCR激動劑和拮抗劑以及鈣通道靶標的有力工具。

熒光顯微鏡