真核生物中mRNA經轉錄后修飾在5'端形成一個特殊結構，即帽子結構，該結構對mRNA的穩定、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷?；D移酶活性和鳥嘌呤甲基轉移酶活性，可將7-甲基鳥嘌呤帽結構（m7Gppp）連接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個小時之內對RNA進行加帽，并且保證正確的方向。本試劑盒應用雙抗夾心酶聯免疫檢測（ELISA）的實驗原理進行牛痘病毒加帽酶殘留量檢測，將牛痘病毒加帽酶標準品和待測樣本加入預包被抗牛痘病毒加帽酶抗體的酶標板（36709-A），然后加入稀釋后的生物素標記的牛痘病毒加帽酶檢測抗體（36709-C），最后加入Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36709-D），形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP 復合物，洗板后加入TMB顯色液（36709-H）顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液（36709-I）的作用下最終轉化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的牛痘病毒加帽酶的量呈正相關。

1. 符合法規：按照Chp、USP、ICHQ2（R2）等要求進行全面驗證；
2. 保障品質：包被和檢測抗體、標準品等原材料全自主研發，可溯源；
3. 配合審計：生產工藝穩定，批間差可控，有完善的審計文件；
4. 靈敏度高：定量下限(LLOQ)可達0.125 ng/mL，檢測下限(LLOD)低至0.065 ng/mL；
5. 精密度高：批內重復性高CV＜10%，批間差異小即中間精密度CV＜15%；
6. 準確性高：樣本加標回收率均在70%~130%范圍內；
7. 專屬性強：向樣本中添加不同類型的干擾物，牛痘病毒加帽酶測試值未見顯著性差異；
8. 穩定性好：試劑盒在37℃條件下可穩定放置7天，性能不受影響。

1. 檢測范圍

試劑盒線性范圍為0.125～8 ng/mL，R²=1.000，各濃度檢測值CV≤10%。標準曲線結果如下：

2. 準確度

向3種不同基質樣本中等比例添加高中低三個濃度Vaccinia Capping Enzyme標準品，同時將高值添加的樣本做倍比稀釋。對倍比稀釋樣本，以及不同加標濃度樣本，未加標樣本中的Vaccinia Capping Enzyme進行檢測，線性回收率和加標回收率在80%-120%之間。結果如下：

加標回收率=實測值/（加標準品×50%+加標本值×50%）

2~8℃保存，未拆封有效期1年。

*收到貨后，請檢查各組分是否齊全，并立即放入對應的保存溫度中儲存。