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DNA的提取原理及提取技術(shù)
天然DNA的來源：
1 染色體DNA
? 原核生物和真核生物均含有染色體DNA,它是分離目的基因和基因表達(dá)調(diào)控因子的主要材料。
2 病毒和噬菌體DNA?
? 主要用于構(gòu)建基因克隆載體，也可作為分離目的基因和基因表達(dá)調(diào)控因子的材料。
質(zhì)粒DNA?
3多微生物（大腸桿菌、農(nóng)桿菌和藍(lán)細(xì)菌）都含有質(zhì)粒DNA，主要用于構(gòu)建基因克隆載體，也可作為分離目的基因和基因表達(dá)調(diào)控因子的材料。
4 線粒體和葉綠體DNA
這是真核生物特有的染色體外遺傳物質(zhì)，分別含有與呼吸作用和光和作用相關(guān)的基因。主要用于分離目的基因。

植物細(xì)胞的化學(xué)成分主要有:
1 水、糖類、蛋白質(zhì)、脂肪以及核酸是生物體所需的基本成分；
2 氨基酸是合成蛋白質(zhì)的基本原料；
3 果膠、纖維素、半纖維素是植物細(xì)胞壁的組成成分；
4 淀粉是光合作用的產(chǎn)物；
5 金屬離子主要用來調(diào)節(jié)細(xì)胞的滲透平衡等，比如鉀和鈉，鎂和錳是葉綠素的成分。

植物總DNA提取原則
保證DNA結(jié)構(gòu)的完整性??
排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染
蛋白質(zhì)、多糖、酚類等降低到最低程度
排除其他核酸分子的污染

植物DNA提取的基本原理
DNA特點(diǎn)：
?? DNA是極性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑。
?? 在酸性溶液中，DNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。
?? DNP在鹽溶液中的溶解度隨著鹽濃度的增加而增加。
植物DNA提取的基本原理
DNA提取基本步驟：
1 細(xì)胞裂解和DNA的溶解
?? 主要任務(wù)：破碎細(xì)胞并對DNA實(shí)施保護(hù)。
?? 采取措施：
??? ⑴利用液氮研磨，使酶失活；
??? ⑵快速加入緩沖液并迅速混勻，對細(xì)胞溶漿中DNA進(jìn)行保護(hù)。
EDTA—螯合DNA酶的輔助因子Mg2+和Ca2+,使DNA酶活性降低；
? SDS—使蛋白質(zhì)變性并降解蛋白質(zhì)，也可降低DNA酶的活性；
? 抗氧化劑—降低酚類氧化對DNA的干擾；
?? PVP—與多酚形成復(fù)雜的聚合體，與多糖結(jié)合，有效去除多糖；
植物DNA提取的基本原理


2? 與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)及RNA等雜質(zhì)的去除；
?? 主要利用DNA與蛋白質(zhì)、多糖等在生化性質(zhì)上的差別，通過加入離子變性劑，去污劑使蛋白質(zhì)或多糖變性，核蛋白解聚。
?? CTAB
?? SDS
除蛋白質(zhì)
氯仿/異戊醇抽提（氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離；異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡）。
使用變性劑變性 （SDS、異硫氰酸胍等）
高鹽洗滌(當(dāng)溶液中的中性鹽的濃度大于1mol/L 時，蛋白質(zhì)會沉淀析出 .)
蛋白酶處理