概念

免疫熒光技術（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。目前我們可以對石蠟切片、冰凍切片、細胞爬片、組織芯片進行免疫熒光檢測。

原理

免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。

實驗流程

（1）石蠟切片脫蠟至水，或者制作的冰凍切片用冷丙酮在4℃固定10－20分鐘；
（2）抗原修復，冰凍切片無需修復；
（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；
（4）滴加正常的血清室溫封閉30 min；
（5）加未標記的特異性抗體，4℃過夜；
（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震蕩漂洗）；
（7）加熒光標記的二抗抗體，37℃濕盒避光作用30 min；
（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；
（9）甘油緩沖液封片；
（10）熒光顯微鏡觀察。

實驗結果

注意事項

1. 熒光有衰減，寄回或者重拍都可能有熒光消失的現象，建議客戶在下單時增加拍照張數。
2.做石蠟包埋樣本保存及運輸：常溫置于4%多聚甲醛固定液內保存及運輸（需注意固定液的量最好是組織的10倍以上，樣本需完全浸泡于固定液內并防止樣本貼壁固定不良，大標本最好使用大的標本瓶/袋運輸，建議在大標本上按取材包埋要求做多條平行切口，以防標本中心固定不透徹。運輸過程中防止固定液滲漏）。
3.做冰凍切片樣本保存及運輸：-80℃或液氮長期保存，干冰運輸。