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一、簡介 NanoDrop 2000 超微量分光光度計是NanoDrop 的最新產品，應用液體的表面張力特性， 樣品體積只需要0.5~2ul，在偵測臺上，經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、 高濃度、免石英管、免毛細管等耗材偵測吸收值的優點。它使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm 的全光譜偵測，且不需要暖機，開機后立即使用。搭配高感 度CCD array 偵測器，偵測吸收值可高達300Abs（dsDNA 濃度2~15000ng/ul），大部分純 化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。 待測樣品的均質性是NanoDrop 2000 的最高要求，一般核酸、蛋白質樣品能在偵測前以 vortex mixer 震勻為最佳，若無vortex mixer 也應以pipette 吸放數次混勻。若擔心genomic DNA 可能因前述動作而斷裂，則改以55 ?C 加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態， 以確保2ul 具有代表性。 偵測時選擇不同偵測模式，可以得到最快速的結果： ● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、 260/280 ratio、260/230 ratio 及核酸濃度。 ● UV-Vis – 190~840nm 間所有波長的吸收值及光譜（以1mm 光徑吸收值呈現）。 ● A280 蛋白質定量法– 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、260/280 ratio 及蛋 白質濃度。僅適用于純化后的蛋白質，須具有已知的質量消光系數（mass extinction coefficient）方可計算。 ● BCA、Bradford 及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果，自動畫出標準曲線 并計算R square，待測蛋白質濃度。 * 蛋白質偵測模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry 三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時間 會逐漸加深，使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標準品，在最佳時間內完成偵測， 以得到良好的標準曲線。每個標準曲線最多可有七個標準品，每個標準品最多可做五重復。 * 測蛋白質時樣品體積需使用2ul，每個樣品偵測后需以labwipe 擦拭15~20 回，以避免 呈色劑與蛋白質的殘留。 二、技術參數： 1、波長范圍: 190-840nm； 2、波長精度: 1nm； 3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)； 4、其它: 1mm 光程長度（可自動調整到0.05mm）； 5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）； 6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）； 7、吸光率精確度：0.002 absorbance (1mm 光程)； 8、吸光率準確性：2%(at 0.76 at 257 nm)； 9、吸光率范圍：0.02-300 (相當于10mm 光程)； 10、核酸檢測周期：< 5s； 11、體積：14cm×20cm。 三、使用方法舉例： dsDNA：在主畫面點選Nucleic Acid，計算機與儀器自動完成聯機。依照DNA 所溶于之液 體準備該溶液（務必確認DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一組kit 的elution buffer）取 出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選DNA-50， 在Sample ID 位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再 按Measure。 四、結果整理： NanoDrop2000 軟件在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未指定，則檔案會存在上一 個使用者的檔案內。 五、注意事項： 1、偵測后立即使用拭鏡紙（Kimwipe 類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走，再 將此laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5 次，Protein 擦20 次）。 2、同一滴液體只能做一次偵測，欲重復定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行 偵測。 3、基本上核酸樣品可使用1~2ul 做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原 則上不超過2ul。并請使用2ul pipette 避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質 樣品因呈色劑與蛋白質本身特性，務必使用2ul 進行偵測。 4、當軟件跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀并依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測 過程液柱并未正確形成，軟件會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下 臺面，或樣品內有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣 品體積加大至2ul。 5、不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其它無腐蝕性之液體皆可使用。 六、日常與定期維護： 1、平時保持臺面及儀器本身清潔。 2、定期校正。