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重組腸激酶

Recombinant Enterokinase

產(chǎn)品貨號： FrdE00003

儲存溫度： 2-8℃

來源：E.coli

1.產(chǎn)品簡介

重組腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經(jīng)純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 -天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）。可以在較寬 pH 范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質(zhì) N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽。

2.應(yīng)用范圍

腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點(diǎn)，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。本重組表達(dá)產(chǎn)品攜帶 his 標(biāo)簽，便于切割目標(biāo)蛋白后除去，保證酶切的可控性和特異性。

本產(chǎn)品為采用重組大腸表達(dá)的高純度、 高活性的重組牛源腸激酶，適用范圍廣（4-45℃， pH4.5-9.5），并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性重組抗體的質(zhì)量檢測；蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測定；其它重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)。

3.產(chǎn)品優(yōu)勢

???本公司生產(chǎn)的腸激酶，其序列與動物腸激酶相同，可以替代動物源性腸激酶用于各個領(lǐng)域；

???酶純度高，活性高，無外源蛋白和動物源性蛋白污染；

???產(chǎn)品以干粉形式存在，便于運(yùn)輸和保存；

???每批次可生產(chǎn)公50g以上，保證批間差和批次穩(wěn)定。

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4.產(chǎn)品性能參數(shù)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?

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*酶活定義：?1U 定義為在 25℃， 12h~16h 之內(nèi)， 將 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量。??

5.產(chǎn)品使用建議

5.1 25℃酶切條件：
按照酶活性定義，酶切條件舉例：25mM Tris-HCl 8.0 體系中：融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量 50-100μg）重組EK 0.1-0.2U25℃過夜酶切，或完全酶切需 16-24h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
5.2 4℃低溫酶切條件：4℃能對底物進(jìn)行有效酶切，但需要將酶切時間延長至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。

5.3 酶切優(yōu)化和放大
優(yōu)化：可以對酶切條件進(jìn)行優(yōu)化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

5.4 去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如 sigma T0637）去除重組腸激酶。

5.5??注意：不建議 37℃條件下酶切， 可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。

6.儲存和運(yùn)輸穩(wěn)定性

酶液儲存穩(wěn)定性： -20℃， 24 個月穩(wěn)定； 25℃，一周內(nèi)，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，0.25M NaCl，? 50%甘油。酶液反復(fù)凍融穩(wěn)定性：反復(fù)凍融5次，無活性損失。運(yùn)輸穩(wěn)定性：藍(lán)冰保溫運(yùn)輸，穩(wěn)定。

7．注意事項(xiàng)

在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響。可參照以下推薦方法進(jìn)行酶切：

7.1 為獲得理想酶切結(jié)果，請將樣品透析到 25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中， 再進(jìn)行酶切。

7.2 若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM 以下， NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即 1U 酶切 500μg 蛋白）。

7.3 如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當(dāng)增加酶量或延長酶切時間，也可達(dá)到較好酶切效果。、

僅供科研生產(chǎn)使用，不能用于人體。

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