核體系酵母文庫構建/均一化cDNA文庫構建/全長cDNA文庫構建/Fosmid文庫構建

核體系酵母文庫構建

酵母雙雜交（Yeast two hybrid）技術是利用酵母遺傳學方法分析蛋白質之間的相互作用，已被廣泛應用于蛋白質組學、細胞信號轉導和功能基因組學等領域，已成為分子生物學研究領域的重要實驗手段。經過不斷的完善和發展，不但可以檢測已知蛋白質之間的相互作用，更重要的是還可發現與已知蛋白相互作用的未知蛋白。
推出兩套酵母雙雜交文庫構建體系：
一是SMART體系，在現有酵母雙雜交文庫構建流程（BD MatchmakerTM library）基礎之上加入獨特步驟，使文庫中高豐度表達基因明顯降低，從而使文庫豐度均一提高篩選陽性率；
二是Gateway體系，采用Gateway位點特異性重組技術（Cloneminer cDNA library construction kit）構建文庫。
應用領域：
檢測細胞核內發生互作的蛋白質，基于轉錄因子的轉錄激活域AD與DNA結合域BD分別構建融合基因 ，通過激活報告基因表達，探測蛋白互作。
部分物種：人、小鼠、大鼠、對蝦、水稻、擬南芥、牡丹、稻飛虱、蘋果、油菜、小麥、煙草、銀杏、土豆、西瓜、棉花。

均一化cDNA文庫構建

均一化cDNA文庫是克服基因轉錄水平上巨大差異給文庫的篩選和分析帶來障礙的有效措施，有利于研究基因的表達和分析。現在，在構建均一化cDNA文庫中至少有兩種主要的觀點。一種是基于復性動力學的原理，高豐度的cDNA在退火下復性速度快，而低豐度的cDNA復性要很長時間，從而可以通過控制復性時間來降低豐度；另一種是基于基因組DNA在拷貝數上具有相對均一化的性質，通過cDNA和DNA的飽和雜交而降低在文庫中高拷貝存在的cDNA的豐度。我們主要通過第一種方法實現均一化，以達到降低基因間拷貝數差異，有助于低拷貝基因的篩選。

操作流程

• RNA提取
• mRNA分離
• cDNA合成與均一化處理
• cDNA長度分級
• 分級后的cDNA與目的載體的all-direct重組
• 重組產物電轉化

均一化cDNA文庫的鑒定
檢測庫容量（總CFU）；隨機挑取32個克隆子，PCR方法檢測平均插入片段大小；抽提均一化cDNA文庫的混合質粒（大抽），qPCR檢測均一化前后兩個文庫總質粒中兩個看家基因的表達量差異，以判斷均一化的效果。

送樣要求

針對每個文庫，客戶需提供200ug以上的RNA或2g以上的組織樣本。

結果提供

我們提供構建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構建報告。

全長cDNA文庫構建

我們提供高全長比例的文庫構建服務，全長比例可以高達85%以上。

普通全長cDNA文庫構建

操作流程

• 客戶樣品QC，Total?RNA的提取。
• mRNA的分離。
• 采用CAP Trapper法進行全長mRNA的富集。
• 以mRNA為模板進行cDNA雙鏈的合成。
• 對合成的cDNA雙鏈進行分級純化。
• 將分級純化的cDNA與載體進行all-direct重組反應。
• 將重組產物轉化DH10B感受態細胞。
• cDNA文庫的QC。檢測文庫庫容量；每個文庫隨機挑取32個克隆子，PCR檢測檢測平均插入片段大小，陽性率； 隨機挑取24個克隆進行正向測序，通過NCBI的BLSTAX分析全長率。

送樣要求

針對每個文庫，客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本，或者至少500ug的總RNA。

結果提供

我們提供構建好的cDNA文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養基），隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，24個克隆正向測序報告，文庫構建報告。

Fosmid文庫構建

提供高質量，高庫容量的Fosmid文庫構建服務

操作流程

• 樣本的QC
• 高質量基因組DNA的提取，基因組DNA的打斷處理
• 打斷后的DNA連接到載體
• 連接產物的包裝和侵染大腸桿菌細胞
• fosmid文庫的檢測：檢測庫容量（總CFU）；隨機挑取16個克隆子，抽提質粒，酶切檢測插入片段大小與陽性率。

我們提供構建好的fosmid文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養基），隨機克隆子的質粒酶切鑒定電泳圖，文庫構建報告。