<div id="a1" class="tab-pane active"> <div id="d1" class="p2"> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細胞介紹</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">該細胞由Oettgen F及其同事從一名29歲的患有廣泛、快速進展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導管中分離建立的。該細胞可產生黑色素，電鏡檢測發現細胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者體內發現了針對該細胞系的抗體。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">細胞特性</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）&nbsp;來源：人 黑色素瘤</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;形態：球形的，懸浮生長</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;含量：&gt;1x10^6 細胞數</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）&nbsp;規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">5）用途：僅供科研使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>運輸和保存</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>干冰運輸及復蘇好存活細胞</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細胞接收后的處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。 </span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10&times;，20&times;）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）<strong>備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。&nbsp;&nbsp;收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。</strong>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; </span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>一．培養基及培養凍存條件準備：</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>1）&nbsp;準備MEM（推薦iCell-0012）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>2）&nbsp;培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。維持細胞濃度在1&times;105~2&times;105，每周補液2~3次。</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>二．&nbsp;細胞處理：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>1）&nbsp;凍存細胞的復蘇：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1&times;105~1&times;10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>下面T25瓶為例；</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1.&nbsp;細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml.</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2.&nbsp;1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3.&nbsp;將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。</span></p> </div> </div>