圖 A. 未經喜樹堿誘導的Jurkat 細胞，用Annexin V-PE 和7-AAD雙染后流式二維圖（左）與直方圖（右）；

圖 B. 用終濃度為4 μM 的喜樹堿誘導Jurkat 細胞凋亡4 h，用Annexin V-PE 和7-AAD雙染后流式二維圖（左）以及直方圖（右）。

圖2. Annexin V-PE/7-AAD染色檢測不同程度凋亡

用喜樹堿（Camptothecin，CPT）誘導Jurkat細胞（人T淋巴瘤細胞）凋亡，誘導濃度分別為0、4、8、12、16μM，分別誘導4小時后，參照產品說明書實驗方案進行染色，用流式細胞儀檢測結果如圖2。

(A)0μM. (B)4μM.(C)8μM.(D)12μM.(E)16μM.(F)競爭封閉實驗，采用16μM CPT誘導Jurkat細胞4小時后，參照說明書收集并洗滌細胞，于染色前加入無染料標記的Annexin V蛋白孵育10分鐘，再進行Annexin V-PE/7-AAD染色。無染料標記的Annexin V結合了細胞上的PS，再進行染色時，Annexin V-PE無法結合PS，這說明了染色的特異性。

在正常細胞中，磷酯酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的PS由內側外翻至外側，從而將PS暴露于細胞外部環境。Annexin V是一種35 - 36 kDa的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與PS具有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞的細胞膜結合。因此Annexin V被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

將Annexin V以藻紅蛋白(Phycoerythrin, PE)進行標記，標記后的Annexin V保留了與PS的高親和力，可作為探針，利用流式細胞儀進行細胞凋亡的檢測。由于在凋亡早期即發生PS外翻，故Annexin V-PE染色在凋亡早期就能識別出凋亡的發生。7-氨基放線菌素(7-AAD)是一種核酸染料，7-AAD不能透過正常細胞或早期凋亡細胞完整的細胞膜，但可穿透膜損傷細胞如晚期凋亡細胞或者壞死細胞的細胞膜并與其內的DNA結合，可用來區分早期凋亡細胞和晚期凋亡細胞或壞死細胞。因此將Annexin V-PE與7-AAD進行共染，就可以區分不同凋亡時期的細胞。

本試劑盒所有組分均在2 - 8℃保存，Annexin V-PE和7-AAD Staining Solution需避光保存，勿冷凍。