口蹄疫病毒 O、A、Asia-I 型檢測試劑盒（實時熒光 PCR 法）說明書

?

【產品名稱】

通用名稱：口蹄疫病毒 O、A、Asia-I 型檢測試劑盒（實時熒光 PCR 法）

英文名稱：Foot and Mouth Disease Virus（O、A、Asia-I）Detection Kit (Triple Channels Real-Time PCR Method)

【包裝規格】 25T/盒 & 50T/盒

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光 PCR 原理，定性檢測口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒，對口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒引起的偶蹄獸類病的診斷和監控具有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒基因組模板的情況下，PCR 反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量 PCR 儀對 PCR 過程中相應通道信號進行實時監測和輸出，實現檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對照為偶蹄獸類基因組 DNA，陽性對照為失去活性的口蹄疫 O、A、Asia-I 型病毒 cDNA。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期 12 個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad 系列、Agilent Stratagene MX 系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene 系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR 儀。

【樣本要求】

1.?新鮮采集的咽拭子、皰疹液和糞便標本，并使用滅菌生理鹽水懸浮。

2.?應避免標本間交叉污染。

3.?標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于 2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。

【檢驗方法】

1.?試劑準備（試劑準備區）

（1）?從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）?核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至 PCR 反應管。

2.?樣本準備（樣本處理區）

用 QIAGEN、Roche 公司 RNA 提取試劑盒提取 RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.?加樣

在上述制備好的 PCR 反應樣本管中分別加入處理好的待測標本 RNA 各 5 μl、終體積 25 μl/管，蓋好 PCR 反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR 儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加 5 μL 試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為 25 μl/管，蓋好 PCR 反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到 PCR 儀器上。

4.?PCR（PCR?擴增區）

（1）?取樣本處理區準備好的 PCR?反應管，放置在實時熒光定量 PCR?儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）?按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行