CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是一種專注于DNA-蛋白互作研究的革新性工具，主要用于識別轉錄因子或組蛋白修飾在全基因組范圍內的結合位點。CUT&Tag分析服務利用酶切與轉座酶標記技術，精準定位轉錄因子或組蛋白修飾在基因組中的結合位點，助力研究DNA-蛋白互作機制，為基因組和表觀遺傳學研究提供精準解決方案。其高靈敏度、低背景噪聲和對微量樣本的優越適應性，使其在表觀遺傳學研究領域獨樹一幟。

Kaya-Okur, H.S. et al. Nat Commun. 2019.

CUT&Tag實驗原理

在基因組和表觀遺傳學研究中，探索DNA-蛋白互作機制是理解基因調控的關鍵。轉錄因子通過結合啟動子或增強子區域的特定DNA序列，調控RNA聚合酶的招募及基因轉錄啟動，其結合效率決定基因表達的時空模式。組蛋白作為染色質的核心組成，通過翻譯后修飾（如乙酰化、甲基化等）調控染色質開放程度和DNA可及性，從而影響轉錄因子與DNA的結合。這種結合既可能激活基因表達，也可能引發沉默效應。蛋白質-DNA互作分析可解析轉錄因子與組蛋白修飾在基因調控中的協同作用，為揭示表觀遺傳機制和疾病發生提供重要線索。

 Itou H,et al.J Biol Chem.2015.

晶體結構中觀察到的蛋白質-DNA 相互作用

CUT&Tag使用ProteinA/G-Tn5融合蛋白直接結合目標蛋白，免除了傳統方法的交聯步驟，大幅降低背景噪聲，并實現高分辨率的結合位點檢測。相比傳統ChIP-seq技術，CUT&Tag更適用于微量樣本，特別是在組蛋白修飾和轉錄因子結合位點研究中展現卓越性能，是揭示基因調控機制的強大工具，為疾病研究和藥物開發提供了高效解決方案。

百泰派克生物科技提供的CUT&Tag分析服務依托先進的Protein A/G-Tn5融合蛋白體系和高通量測序平臺，專注于解析蛋白質-DNA互作，特別是轉錄因子結合位點和組蛋白修飾的全基因組分布。我們的服務涵蓋從樣本制備、測序到數據分析的全流程支持，提供全面的基因組注釋、功能分析和信號通路解析，幫助客戶精準揭示基因調控網絡，為表觀遺傳學、疾病研究和新藥開發提供高效解決方案：

1. 樣本處理與磁珠結合

使用ConA磁珠與細胞膜上的糖蛋白結合，提取細胞核或直接利用細胞核樣本。同時，通過洋地黃皂苷（digitonin）透化細胞膜以增強核膜通透性，為后續抗體結合創造條件。

2.一抗與二抗結合

加入針對靶標蛋白的特異性抗體（一抗）并進行孵育（如α-H3K27me3作為陽性對照，同型對照IgG作為陰性對照），隨后洗滌去除非特異性結合。再加入二抗，確保抗體復合物成功結合靶標區域。

3. Protein A/G-Tn5轉座體結合

采用Protein A/G-Tn5融合蛋白與抗體復合物結合，將Tn5轉座酶精準定位到靶標蛋白結合的DNA區域，形成高效轉座復合體，為后續片段化和接頭連接奠定基礎。

4. Tn5轉座酶激活與DNA片段化

加入含Mg²?的反應液激活Tn5轉座酶，在靶標DNA結合位點進行精準片段化，同時將測序接頭直接插入DNA片段，完成文庫前期構建。

5. 測序與生物信息分析

利用Illumina測序平臺對文庫進行高通量測序，獲得高分辨率數據。結合專業的數據分析平臺，完成質控、基因組比對、富集峰注釋、Motif識別、GO功能分析和KEGG通路分析，為研究轉錄因子及組蛋白修飾的功能作用提供全面解析。

 Galli, S. et al. RSC Chem Biol. 2024.

CUT&Tag技術流程

技術優勢

與傳統的ChIP-seq技術相比，CUT&Tag在多個維度上表現優異：

·背景噪聲更低：無需化學交聯，減少非特異性結合。

·分辨率更高：可清晰定位到轉錄因子和組蛋白修飾的結合區域。

·加速實驗周期：整合片段化與文庫構建流程，大幅縮短實驗周期?

送樣建議

百泰派克生物科技的CUT&Tag分析服務通過高效的轉座酶標記與酶切技術，為基因組和表觀遺傳學研究提供精準的蛋白-DNA互作分析。準確的樣本制備和儲存是實現高質量分析的關鍵，因此建議按照以下方法處理您的樣本：

細胞樣本

1. 清洗與消化：移除舊培養液后，用PBS清洗一次。加入適量胰蛋白酶（覆蓋細胞層表面）輕輕消化。

2. 離心與洗滌：以1000rpm離心5分鐘，去除上清后再用PBS清洗一次。

3. 保存準備：加入適量配制好的凍存培養液，輕輕吹勻細胞并進行計數。建議每管細胞數量≥50萬個。

4. 分裝與冷凍：將細胞分裝到凍存管中，每管加入150μl凍存液，確保每個樣本平行2-3管。樣本應在-80℃冰箱中預冷后儲存，并采用干冰運輸。

組織樣本

1. 取樣與清洗：從活體獲取的新鮮組織應使用PBS清洗表面污物。樣本可在4℃的1640或DMEM培養基中臨時存放，但需在3小時內完成后續處理。

2. 切割與處理：將組織切割成細小碎片或肉糜狀，分裝到多個凍存管中，建議每個樣本分裝2-3個管。

3. 凍存液準備：可選擇以下兩種方式：

·使用10% DMSO+90%胎牛血清的凍存液，保持4℃運輸。

·液氮速凍儲存，建議溫度保持在-80℃以下，用干冰運輸。

若有其他特殊樣品，請隨時與我們聯系。

結果展示

案例分析

CUT&Tag 揭示組蛋白乳酸化修飾在胰腺導管腺癌（PDAC）中的基因組分布及其對基因表達的影響

研究利用CUT&Tag技術分析了乳酸化修飾在PDAC中的基因組分布及其對基因表達的影響。通過CUT&Tag繪制了組蛋白乳酸化（H3K18la）在胰腺癌細胞基因組中的結合圖譜，研究發現H3K18la主要富集于腫瘤相關基因的啟動子和增強子區域，結合RNA-seq數據表明，這些區域的乳酸化水平與糖酵解及腫瘤相關基因的高表達密切相關。研究進一步揭示了糖酵解代謝產生的乳酸可驅動組蛋白乳酸化，而乳酸化修飾又通過促進糖酵解關鍵基因的表達形成正反饋回路，從而加速腫瘤進展。通過這一機制，研究強調了乳酸化修飾在PDAC中的關鍵作用，并為腫瘤治療提供了潛在的靶點。CUT&Tag技術靈敏高效地揭示了H3K18la的染色質結合特性，展現出其在解析組蛋白翻譯后修飾機制中的重要優勢。

Li, F. et al. Mol Cancer. 2024.

CUT&Tag分析以篩選H3K18la的結合位點

百泰派克生物科技的CUT&Tag分析服務能夠高效挖掘基因調控的核心機制。我們的專業團隊和先進平臺為每一位客戶提供高質量、可重復的研究數據，助力生命科學領域的重大突破。歡迎聯系我們，了解更多關于CUT&Tag分析服務的詳細信息。

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其他相關服務

特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

六、基因敲除

百泰派克生物科技（BTP）采用優化的CRISPR/Cas9系統為您提供高通量基因敲除服務，包括病毒包裝、質粒制備、Cas9濃度測試等，為您解決選擇哪個細胞進行敲除、可不可以敲除、如何敲除以及敲除效率如何等關鍵問題?？蛇M行單/多基因敲除、移碼突變和大序列敲除。我們的人全基因組基因敲除陣列Array文庫覆蓋了完整的人類全基因組，全基因組陣列敲除庫已在人原代細胞全部完成高內涵篩選的驗證，超過80%以上的靶點達到70%以上的敲除效率。

※服務優勢：

1.樣本適用性強

適用于人、小鼠的細胞系，原代細胞，免疫細胞及iPS細胞等。

2.基因必要性及表達量分析

在進行基因敲除實驗前，我們會基于生物信息學和蛋白質組學數據對不同細胞中基因必要性及表達量進行分析，確保實驗的可行性，降低實驗風險。

3.gRNA無需從頭設計和驗證

我們完成了人類全基因組gRNA的全部驗證，與藥物相關的靶點也完成了PCR測序驗證，無需針對客戶的靶點設計預實驗進行gRNA驗證，大大縮短了項目周期。

4.高通量高效率

我們采用優化的CRISPR/Cas9系統進行高通量基因敲除，多個sgRNA/靶基因設計保證高敲除效率，超過80%靶點敲除效率在70%以上，短期內（10天內）即可提供高敲除效率的KO pool，滿足絕大多數的應用場景。

5.敲除效率雙驗證

基因敲除后，我們采用WB實驗中抗體KO驗證的shǒuxuǎn方法——Sanger測序和深度蛋白質組學技術對敲除效率進行雙驗證，數據真實性的雙重保障。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!