HiScript??III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)

第三代高效cDNA?一鏈合成試劑盒（去基因組）

基于更高效的HiScript?III Reverse Transcriptase：逆轉錄效率高于二代產品

靈活選擇引物：?針對不同實驗設計可靈活使用不同類型的逆轉錄引物

gDNA wiper Mix可迅速徹底去除基因組污染：保證后續結果更加可靠，并可簡化qPCR引物設計，無需跨內含子設計引物

1.后續實驗為PCR

以1μg ?HeLa細胞RNA為模板，按照R302說明書推薦體系進行逆轉錄，以1μl cDNA為模板，用2 ×Vazyme Lamp??Master Mix (Dye Plus)（Vazyme #P312）進行長片段擴增，將得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳，結果如圖1所示：擴增條帶單一且產量高

圖1.長片段擴增電泳圖

注：M：DL15000 Marker(Vazyme #MD103)

2.后續實驗為qPCR

以100 ng HeLa 細胞 RNA為模板，使用 HiScript??III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R312) 以及市售其他逆轉錄產品 (分別來自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti)，按照各自說明書推薦程序進行逆轉錄反應。將得到的 cDNA 進行多個基因的 qPCR定量分析。以不同公司產品為橫坐標，△CT?(△CT?= Vazyme #R312 cDNA擴增CT值–各公司逆轉錄產品 cDNA 擴增CT值)為縱坐標繪圖。從圖中可以看出，除一些體系Th1△CT＞0外，其余公司逆轉錄產品均△CT＜0，說明 Vazyme #R312逆轉錄效率優于Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相關逆轉錄產品。

HiScript??III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript??II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)的升級版本，包含新一代逆轉錄酶HiScript??III Reverse Transcriptase和針對逆轉錄優化的最適Buffer，進一步提高了一鏈合成的效率。該試劑盒中的5 × gDNAwiper Mix可在42℃，2 min條件下快速去除基因組DNA污染，保證后續結果更加可靠，并可簡化qPCR引物設計，無需跨內含子設計引物。試劑盒中包含單組分逆轉錄引物Oligo (dT)20VN和Random hexamers，用戶可根據需要，靈活選擇逆轉錄引物進行后續實驗。本試劑盒既可合成用于克隆等下游實驗的全長cDNA (可達20 kb)，亦可合成高度均一的用于qPCR定量的cDNA。

a. 包含dNTP

b. 包含RNase inhibitor