快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（10preps)
產品名稱： 快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（10preps)
英文名稱： EndoFree plasmid ezFlow ezFilter midi kit
產品編號： PD1422-01
產品價格： 0
產品產地： 美國圣地亞哥
品牌商標： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國）
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- 郵編 : 201109
- 所在區域 : 上海
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試劑盒組分：
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Catalog # |
PD1422-01 |
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Preps |
10 |
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EzBindTM Columns |
10 |
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Filter syringe (20 mL) |
10 |
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Buffer A1 |
30 mL |
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Buffer B1 |
30 mL |
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Buffer N3 |
40 mL |
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Buffer KB |
60 mL |
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Buffer RET |
60 mL |
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Endofree Elution Buffer |
15 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
3 mg(150 μL) |
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User Manual |
1 |
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保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項：
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- 質粒拷貝數：純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和EndoFree Elution Buffer.
- 轉化菌: 若為-70℃甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 柱結合能力：250 μg
- 對富含內源核酸酶的宿主菌（endA＋）如HB101, JM101, TG1等，需去核酸酶，請使用產品PD1712。
操作簡明步驟：
- 取50 μL新鮮的菌液接種到15-50 mL (勿超過 50 mL)的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入1 mL Buffer N3, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將裂解液轉移至過濾器中，放在一個15 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來，對準15 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過，有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注：靜至10 分鐘時RNase A將工作，排除RNA污染。若離心十分鐘后再用過濾器過濾更有利于去除蛋白。
- 向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混勻，需馬上離心過DNA柱。
- 立即轉移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下5,000 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
- 可選：向離心柱中加入5 mL Buffer KB，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機中，室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL的Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。將15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。