psiCHECK-2.pdf說明

psiCHECK^TM -1 和psiCHECK^TM -2 載體用于對RNA干擾(RNAi)的早期優化提供快速的定量方法。此載體可監測與報告基因融合的目的基因表達的變化。兩種載體都應用海腎螢光素酶作為主要報告基因，目的基因被克隆至海腎螢光素酶翻譯終止密碼子下游的多克隆位點。由合成的siRNA 或體內表達的shRNA 引發的針對目的基因的RNAi過程，導致融合mRNA 的剪切和隨后的降解。檢測海腎螢光素酶活性的降低是一種監測RNAi 效果的簡便方法。與其它的融合蛋白檢測法( 如GFP 或flag 標簽) 相比，海腎螢光素酶方法靈敏度更高、更方便、定量更快速。推薦psiCHECK^TM -1 載體用于檢測活細胞中的RNAi 效果。使用EnduRen^TM 活細胞底物(Cat.# E6481) 檢測海腎螢光素酶活性變化，這種底物可持續監測細胞內的海腎螢光素酶的發光。psiCHECK^TM -2 載體含有第二個報告基因——螢火蟲螢光素酶, 被設計用于終點裂解檢測。其作用是使海腎螢光素酶表達歸一化，可以得到強勁且可重復的數據。

特點

. 節省花費：使用普通的發光檢測儀定量即可；無需購買昂貴的儀器。

• 有不同模式：可選擇進行活細胞或細胞裂解物檢測操作。

• 節約時間：無需費力費時的檢測或等待表型的改變。

• 便利：使用psiCHECK^TM -2 載體無需對轉染進行歸一化。

操作手冊

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