產品介紹：

別藻藍蛋白(Allophycocyanin ,APC)是一種從紅藻中提純的高亮度藻膽蛋白，屬于遠紅色熒光，具有很高的量子產量。激光594 nm和633 nm處激發其發光，在650 nm處吸收峰最大，在660 nm處熒光發射峰最大。APC比普通的化學發光強100倍，在普通應用中，其至少可以提高靈敏度5-10倍，主要用于流式細胞術、微陣列分析、ELISAs等。APC主要優點是發射長波熒光，抗淬滅性強，高水溶性，均質結構，分子量確定。

基本原理：

本試劑盒利用抗體和APC上游離的氨基，采用定向對接偶聯技術將抗體分子與APC共價偶聯，主要特點：

ü??試劑盒組分齊全，操作簡單，只要按照操作步驟進行便可得到高品質APC偶聯抗體；

ü??本試劑盒所配置的APC為高純度，高活性熒光蛋白，熒光發光效率更高；

ü??本試劑采用定向偶聯技術，熒光蛋白和抗體都不會發生自連，保證偶聯物的特異性和均一性；

ü??試劑盒所使用的交聯劑增加了延長臂，確保不會因為蛋白質位阻而影響發光效率；

ü??鑒于APC的蛋白骨架特性，其抗淬滅能力更強。

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試劑盒已經提供材料：

ü??APC蛋白 ????????????1mg*1支? 可用于標記0.5mg抗體

ü??APC蛋白活化試劑 ????2mg*1支? 使用時加ddH2O 200ul

ü??標記緩沖液 ?????????30ml*1瓶

ü??抗體修飾試劑 ???????2mg*1支 使用時加ddH2O 1000ul

ü??30KMWCO超濾管?????? 3支

ü??封閉試劑 ???????????2mg*1支 使用時加DMSO 200ul

ü??DMSO溶劑 ????????????1ml*1支

ü??說明書 ??????????????1份

其他需要自備試劑材料：

2??待標記的生物分子；

2??移液器及吸頭；

2??去離子水。

試劑盒儲存

試劑盒放在-20?C可保存6個月以上。

試劑盒操作流程：

1a.抗體的修飾?與1b.APC的活化兩個步驟同時進行

1a.抗體的修飾

1）抗體修飾試劑溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗體修飾試劑溶液。

2）取待標記抗體（純度>90%），濃度調整到 5mg/ml以上為宜，按照每毫克抗體加入5μl?抗體修飾試劑溶液，輕輕混勻，在室溫下攪拌反應 60-90分鐘。

3）超濾管內芯添加標記緩沖液，通過超濾管多次離心置換溶液，去除多余抗體修飾試劑，超濾管內芯收集液為修飾抗體，并調節濃度至 3mg/ml。

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1b.APC蛋白的活化

1）取APC蛋白懸液4℃?12,000rpm?離心?5?分鐘?,小心吸掉上清，盡量不留殘液；

2）底部沉淀用標記緩沖液重新溶解沉淀，4℃?12,000rpm?離心?5?分鐘?,取上清藍色溶液部分為APC蛋白溶液；

3）將APC蛋白活化試劑溶解于ddH2O，配制成5mg/ml溶液，按照每毫克APC蛋白加入100ul的比例加入到APC蛋白溶液，室溫避光反應2小時；

4）反應完畢，通過超濾管離心4次，每次120，00rpm 5min,置換為標記緩沖液,以去除游離的APC蛋白活化試劑，濾芯內溶液即為活化APC蛋白。

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2.活化APC蛋白與抗體偶聯

1）活化APC蛋白濃度調整為5mg/ml；

2）將修飾抗體與活化APC蛋白，按照質量比1:2比例（每毫克修飾抗體對應2毫克活化APC蛋白）混合，室溫避光反應2小時；

3）將封閉試劑管中加入200ul DMSO,配置成10mg/ml封閉試劑溶液；按照每毫克抗體3.4ul的體積加入步驟2）反應產物中，封閉未反應完的活性基團；

4）標記好的抗體分裝，4℃保存備用，或加入適當保護劑，-20℃保存備用。

注意事項：

1）本試劑盒中抗體修飾試劑為高活性試劑，請-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿凍存。

2）試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒，會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理，以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。

3）本試劑盒中APC蛋白需要避光低溫保存，標記過程盡量保證其避光；

4）封閉劑需現用現配，干粉溶解后不能長期保存；

5）使用本試劑盒標記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失，因此標記前準備抗體時需根據具體情況考慮最適的抗體量；

6）由于抗體修飾后所帶的基團容易被重新氧化，因此修飾后抗體需盡快與活化的APC進行偶聯；

7）本試劑盒中的超濾管為特殊處理的，可有效避免熒光淬滅和蛋白吸附損失，市面超濾管可能會對標記效率造成影響。

8）本試劑盒中部分試劑為高活性試劑，對皮膚和身體有一定的危害，請全程戴手套操作；DMSO屬微毒類，對人體皮膚有滲透性，對眼有刺激作用，使用時避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。