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土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書
微量法?100T/96S
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測定意義：
土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經過礦化分解而轉化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養狀況。
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測定原理：
利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經高溫灼燒后，土壤有機磷轉化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機磷含量。
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自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、可調式水浴鍋，分析天平、可調式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。
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試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 8mL 蒸餾水，充分溶解后加入 4mL
試劑二，混勻。
標準品：液體×1 支，40 μg/ml 無機磷標準品，4℃保存。
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土壤不同形態磷提?。?/span>
1.無機磷：稱取通過 100 目篩子的風干土樣 0.01g，轉移到 1mL 離心管，加入 1mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，離心 10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。
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2.總磷提?。喝⊥ㄟ^ 100 目篩子的風干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.01g，轉移到1 mL 離心管，加入 1mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，離心 10min，取上清液二，用于總磷含量測定。
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測定步驟：
1. 分光光度計預熱 30 min 以上，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。
2.打開水浴鍋，調節溫度到 40℃。
3. 空白管：取 EP 管，依次加入 100μL 蒸餾水，100μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。
4. 標準管：取 EP 管，依次加入 10μL 標準液，90μL 蒸餾水，100μL 試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標準管。
5. 測定管：取 EP 管，依次加入 10μL 上清液一或者上清液二，90μL 蒸餾水，100μL 試劑
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三，混勻后置于?40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A測定管。
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土壤磷含量計算：
1.土壤無機磷含量（μg /g）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W=40×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W
C 標準液：40 μg/ml； 
W：土壤樣品質量，g； 
V 總：上清液一總體積，1 mL。
2.土壤總磷含量（μg/g）=[C 標準液×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×V 總÷W=40×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)÷W
C 標準液：40 μg/ml；
W：土壤樣品質量，g；
V 總：上清液二總體積，1mL。
3. 土壤有機磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無機磷
注意事項：
試劑三配制過程中，可能會產生黑色固體，其不影響結果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。
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