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平行檢測成熟miRNA和miRNA前體。
使用miRNeasy Mini Kit從HeLa S3細胞中純化總RNA。使用miScript II RT Kit及附帶的miScript HiFlex Buffer制備cDNA。在real-time PCR中，使用miScript Primer Assay對成熟miRNA進行定量，使用miScript Precursor Assay對前體miRNA進行定量。使用針對RNU6-2的miScript PCR Control進行標準化。在Rotor-Gene Q實時熒光定量PCR分析儀上進行real-time PCR。使用miScript PCR System，在real-time PCR平行反應中高效定量成熟miRNA及其前體miRNA。
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性能
miScript Precursor Assays可準確檢測miRNAs前體，可用于需同時檢測miRNAs前體和成熟miRNAs的實驗（參見"Parallel detection of mature and precursor miRNA"）。
原理
miScript PCR System配合SYBR?Green-based real-time PCR，靈敏和特異性地檢測并定量miRNA。miScript PCR System可以完成從RNA中合成cDNA和后續的real-time PCR檢測miRNAs涉及的所有步驟。?
使用miScript PCR System進行miRNA前體檢測和定量，需要以下組件：
miScript II RT Kit，可簡單、單步合成cDNA。單個cDNA合成反應可用于檢測數以百計的miRNAs。雙緩沖體系滿足使用real-time PCR進行miRNA定量的獨特要求。
miScript SYBR?Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR?Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array進行miRNAs檢測。如需檢測miRNA前體，無需使用miScript Universal Primer。
miScript Precursor Assay，包含miRNA前體特異性正向和反向引物，配合miRBase中的最新信息，檢測miRNA前體。miRNA前體檢測可與成熟miRNA（使用miScript Primer Assay檢測）和mRNA（使用QuantiTect Primer Assay檢測）檢測同時進行，使用相同的cDNA樣本。miScript Universal Primer不用于檢測miRNA前體。
miRNA前體研究
miScript Precursor Assays包含miRNA前體特異性正向和反向引物，靶向作用于研究中的miRNA前體的莖環序列。miScript Precursor Assay靶向于初級miRNA（pri-miRNA）和miRNA前體的莖環序列，因此miScript Precursor Assays可同時定量初級miRNA和miRNA前體。miRNA前體檢測可用于miRNA生物研究、調控和功能研究。不同miRNAs的成熟和miRNA前體水平各有不同。另外，在不同條件和組織中，成熟miRNAs可從不同的miRNAs前體中表達。
操作流程
miRNA前體檢測實驗中，使用miScript II RT Kit中的miScript HiFlex Buffer，通過逆轉錄反應制備cDNA，作為real-time PCR的模板。Real-time PCR配合miScript Precursor Assay和miScript SYBR Green PCR Kit中的QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix進行。
應用
miScript Precursor Assays作為miScript PCR System的一部分，用于miRNA前體的檢測。
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