NMY51 酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

DUAL membrane系統是專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測技術， 它利用分離的泛素系統 直接檢測天然狀態下膜蛋白間的相互作用的酵母雙雜系統。此系統采用NMY51酵母菌株，可直接轉化質 粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗；此菌株Transformation marker為：trp1，leu2-3，報告基因為：HIS3，ADE2和 lacZ， 第一步通過營養缺陷型報告基因 (HIS3，ADE2)進行選擇性生長 篩選，進一步通過 LacZ報告基因進行β-半乳糖分析顯色的定 量或半定量篩選，三個獨立的報告基因，受不同啟動子的調控， 降低假陽性幾率。此系統可使用四種Bait質粒：pBT3-N，pBT3- C，pBT3-SUC，pBT3-STE，篩選標志均為LEU；四種Prey質粒： pPR3-C，pPR3-N，pPR3-SUC，pPR3-STE，篩選標志均為TRP。 NMY51感受態細胞經特殊工藝制作，pGADT7質粒檢測轉化效率 >10⁴cfu/μg DNA

基因型：MATahis3200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4- HIS3ura3::(lexAop)8-lacZade2::(lexAop) 8-ADE2 G

2.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg, Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰.上融化的NMY51感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

3.注意事項：

1).感受態細胞最好在冰上融化。

2). PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫下完全溶解后使用。

*本試劑僅供實驗室研究使用