小鼠直擴(kuò)PCR試劑盒
產(chǎn)品名稱： 小鼠直擴(kuò)PCR試劑盒
英文名稱： Mouse Tissue Direct PCR Kit Pro
產(chǎn)品編號： 10191ES
產(chǎn)品價格： 詢價
產(chǎn)品產(chǎn)地： Yeasen
品牌商標(biāo)： Yeasen
更新時間： 2025-11-13T12:51:35
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 李自轉(zhuǎn)
- 地址 : 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄一號樓三層南單元
- 郵編 : 200030
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 139****5640 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二維碼 : 點擊查看
本試劑盒包含組織快速裂解試劑和擴(kuò)增試劑，可直接對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肝臟、腎臟等）樣本進(jìn)行裂解，快速釋放基因組DNA，還可兼容血液、細(xì)胞懸浮液等樣本，裂解產(chǎn)物的上清液可直接加入到 PCR反應(yīng)體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，2~5 mm2鼠耳或肝臟、1~5 mm鼠尾、1~2個腳趾均可進(jìn)行實驗。
本試劑盒提供的 2× Hieff® Tissue Direct PCR Mix（With Dye）為 2倍濃度的PCR反應(yīng)液，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率，可廣泛擴(kuò)增10 Kb及以內(nèi)的片段。
該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因鑒定、小鼠基因分型等。
- 直擴(kuò)片段長：最長可直擴(kuò)10 kb片段。
- 快速延伸：5-10秒/kb延伸速度，省時高效。
- 耐受性好：裂解液投入量可達(dá)到擴(kuò)增體系20%。
- 裂解靈活：95℃3分鐘裂解/60℃15分鐘裂解。
- 多重擴(kuò)增：至多可滿足5-7重擴(kuò)增。
- 穩(wěn)定可靠：試劑盒&裂解產(chǎn)物穩(wěn)定性好。
- 可滿足10 kb以內(nèi)的小鼠直擴(kuò)
▲可滿足10kb以內(nèi)的小鼠直擴(kuò)。分別裂解鼠尾、鼠耳、鼠趾和鼠腎，取1 μL 裂解產(chǎn)物擴(kuò)增1~10 kb片段。其中翌圣10191ES采用95℃高溫3分鐘裂解，5-10 sec/kb的延伸速度進(jìn)行擴(kuò)增，其他品牌采用各自對應(yīng)說明書進(jìn)行反應(yīng)。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示10191ES在快速裂解和快速擴(kuò)增的情況下，可保證10kb以內(nèi)的片段擴(kuò)增。
- 覆蓋30%-70%GC含量的片段
▲可滿足10kb以內(nèi)不同GC含量片段的小鼠直擴(kuò)。取1 μL 裂解產(chǎn)物擴(kuò)增1~10 kb中不同GC含量的片段。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示10191ES可滿足10kb以內(nèi)不同GC含量的片段擴(kuò)增，GC含量覆蓋范圍為30%-70%。
- PCR耐受性好
▲耐受性好。分別取95℃高溫3分鐘裂解后的不同體積裂解產(chǎn)物擴(kuò)增1~10 kb片段，PCR擴(kuò)增體系為20 μL，5-10 sec/kb的延伸速度進(jìn)行擴(kuò)增。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示PCR組分對裂解液有優(yōu)秀的耐受性，裂解液投入量可達(dá)到擴(kuò)增體系的20%。
- 裂解產(chǎn)物多重擴(kuò)增
▲裂解產(chǎn)物可滿足7重擴(kuò)增。取95℃高溫3分鐘裂解后的裂解產(chǎn)物進(jìn)行7重引物擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增體系為25 μL，5 sec/kb的延伸速度進(jìn)行擴(kuò)增。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示翌圣10191ES可擴(kuò)增500 bp~5 kb的7重條帶。
- 裂解產(chǎn)物穩(wěn)定性好
▲鼠組織裂解產(chǎn)物穩(wěn)定性好。取裂解的鼠尾上清液保存于25℃恒溫箱和4℃冰箱中4周，PCR擴(kuò)增檢測1~10 kb片段。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示相比新鮮裂解液，裂解產(chǎn)物在保存一段時間后，仍能夠保證擴(kuò)增檢出。
- 試劑盒穩(wěn)定好
▲試劑盒穩(wěn)定性好。將10191ES全套試劑盒保存于25℃恒溫箱和4℃冰箱中4周，37℃恒溫箱中2周。PCR擴(kuò)增檢測1~10 kb片段。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示試劑盒穩(wěn)定性好，仍能夠保證擴(kuò)增檢出。
未開封狀態(tài)下，-25~-15℃保存，有效期1年。
開封后A、B組分4℃保存，有效期1年。若長時間多次使用，請分裝后儲存，避免交叉污染。
開封后C組分-25~-15℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期1年。
1. 電泳條帶弱（擴(kuò)增產(chǎn)量低）
1）引物：優(yōu)化引物設(shè)計；
2）退火溫度：設(shè)置退火溫度梯度，找到合適的退火溫度；
3）引物濃度：適當(dāng)提高引物濃度；
4）延伸時間：適當(dāng)增加延伸時間至10 sec/kb；
5）循環(huán)數(shù)：增加循環(huán)數(shù)至36~ 40個循環(huán)；
6）模板量不足：樣本裂解不徹底導(dǎo)致DNA釋放量少，可適當(dāng)延長裂解時間至20min或提高裂解溫度至95℃。
2. 有雜帶或彌散條帶
1）引物設(shè)計問題：引物錯配導(dǎo)致擴(kuò)增特異性差，需重新設(shè)計引物，可以先用精提模板擴(kuò)增，驗證引物設(shè)計的合理性；
2）退火溫度：嘗試提高退火溫度并設(shè)置退火溫度梯度；
3）引物濃度：適當(dāng)降低引物濃度；
4）循環(huán)數(shù)：減少循環(huán)數(shù)至25~30個循環(huán)；
5）模板降解：更換高質(zhì)量模板。
3. 產(chǎn)物堵膠孔
1）清潔實驗環(huán)境，避免氣溶膠污染；
2）模板使用量：降低模板使用量；
3）循環(huán)數(shù)：減少循環(huán)數(shù)至25~30個循環(huán)；
4）退火溫度：設(shè)置退火溫度梯度，摸索最佳退火溫度。