MSCgo™成脂誘導分化試劑
產品名稱： MSCgo™成脂誘導分化試劑
英文名稱： MSCgo™ Adipogenic Differentiation Basal Medium
產品編號： 05-330，05-331，05-332
產品價格： 0
產品產地： 以色列
品牌商標： Biological industries（BI）
更新時間： null
使用范圍： null
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產品描述
MSCgo?Adipogenic Differentiation Medium間充質干細胞成脂誘導分化培養基，無血清，無異源成分，即用型，適用于不同來源的hMSC，如骨髓、脂肪組織和臍帶組織（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。
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成脂結果
成脂分化后的hMSC會成球狀，并且伴隨有脂滴累積，該現象可透過倒置顯微鏡觀察。不同的細胞來源?(類型、年齡、代數)所得到的分化細胞數會有差異。
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培養基組成
MSCgo?間質干細胞成脂誘導分化培養基
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產品描述 |
儲存 |
貨號 |
規格 |
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MSCgo? Adipogenic Differentiation Basal Medium |
2-8°C |
05-330-1B |
100ml |
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MSCgo? AdipogenicSF,XF Supplement Mix I |
-20°C |
05-331-1-01 |
0.1ml |
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MSCgo? AdipogenicSF,XF Supplement Mix II |
-20°C |
05-332-1-15 |
1.5ml |
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完全分化培養基配制
1?????????室溫下解凍2個Supplement Mix。
2?????????將0.1ml Supplement Mix I與?1.5ml Supplement Mix II?加入到100ml Adipogenic Basal Medium?中，于2-8°C儲存。
3?????????完全培養基可在2-8°C儲存一個月。
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成脂實驗所需材料
維持培養基
MSC NutriStem? XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1??
??注：若您有MSC血清或者其他培養試劑也可使用。
MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1
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分化培養基
MSCgo? Adipogenic Differentiation Medium：05-330-1?，05-331-1，05-332-1
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染色試劑（可選）
Oil Red O，Sigma；O0625。建議選擇Vivacell品牌，間充質干細胞成脂分化染色試劑盒，貨號：C37A00150。
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成脂誘導分化操作
以維持培養基接種hMSC
1?????????用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS?稀釋)?預包被24孔盤，每孔加入0.5ml MSC NutriStem??XF，接種6x104細胞（3x104?cells/cm2）。
??此處僅為針對成脂誘導的細胞接種操作，MSC NutriStem??XF Medium詳細操作步驟請參考其說明書。
2?????????置于37°C，5%?CO2細胞培養箱中培養。
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以成脂分化培養基誘導分化
1?????????培養24h后確認細胞融合度達到80-90%，將維持培養基吸除，每孔（24孔盤）加入0.5ml分化培養基。
??注：若細胞融合度<80%，繼續再培養一天。
2?????????置于37°C，5% CO2細胞培養箱中培養14-21天，期間培養基的換液請參照以下建議。
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不同hMSC類型的培養基換液方法
不同來源的hMSC具有不同的多向分化潛能。例如，hMSC-AT所需的誘導期較短?(~ 6天)，而hMSC-BM和hMSC-CT則需要約10天的誘導期。
??不同來源干細胞有不同建議，請參考下面說明。
??由于脂肪細胞是脆弱的，移液要非常小心，避免將液體直接加到脂肪細胞上。
??細胞誘導完成后，使用維持培養基培養。
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hMSC-AT（脂肪來源）:
一個分化周期/分化培養基?->維持培養基
l??使用完全分化培養基培養6-8天，期間每3-4天換液。
l??分化完成后，換液成維持培養基，繼續培養3-4天。
l??觀察到成熟脂肪細胞（即脂滴的形成），即可染色。
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hMSC-BM（骨髓來源）：
一個分化周期/分化培養基?->維持培養基
l??使用完全分化培養基培養8-12天，期間每3-4天換液。
l??分化完成后，換液成維持培養基，繼續培養3-4天。
l觀察到成熟脂肪細胞（即脂滴的形成），即可染色。
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hMSC-CT（臍帶來源）：
至少兩個分化周期/分化培養基?->維持培養基
l??使用完全分化培養基培養5-10天，期間每3-4天換液。
l??分化期間，若細胞開始變圓、不貼壁，換液成維持培養基，培養3-6天，每2-4天換液。
l?再重復誘導分化步驟，直到觀察到成熟脂肪細胞（即脂滴的形成），即可染色。
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Oil red-O?染色分析?（可選）
Oil red-O?用于染色脂滴。
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Oil red-O?染色儲存液制備
l??將0.35g Oil Red-O (Sigma；O0625)?溶解到100ml異丙醇（>99.5%）中。
l??用0.2?或?0.45 μm PTFE?濾膜（如：Minisart SRP 17575）過濾。
l??溶液置于2-8°C儲存一年。
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Oil red-O?染色工作液制備
l??將6ml Oil red-O染色儲存液與4ml?蒸餾水混合。
l??混合均勻，室溫下靜置10-20分鐘。
l??用0.2?或?0.45 μm PTFE?濾膜(如：Minisart SRP 17575)過濾。
l??2-3?小時內使用。
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Oil red-O?染色過程
l??吸除培養基，用DPBS洗一次（1ml/well, 24孔盤）
l??固定：吸除DPBS，加入10%?福爾馬林（4%?甲醛；1ml/well, 24孔盤）。室溫固定30-60分鐘。
l??吸除福爾馬林，用60%的異丙醇洗滌2-3分鐘（1ml/well, 24孔盤）。
l??吸除異丙醇，加入Oil red-O?染色工作液（1ml/well, 24孔盤）。
l??室溫靜置10-30分鐘。
l??用蒸餾水洗滌，去除多余的染料。
l??置于顯微鏡下觀察成脂染色效果及圖像采集。
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半定量Oil red-O?染色?（可選）
l??用異丙醇（>99.5%）洗滌染料（0.5ml/well, 24孔盤）。
l??室溫下靜置1小時。
l??確定所有Oil red-O溶解在溶液中。
l??500nm?測OD值（>99.5%?異丙醇作為空白對照）。
產品官網鏈接：https://www.bioind.com/worldwide/adipogenic-differentiation-media/