產(chǎn)品介紹：

2019年低，嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）開(kāi)始肆虐全球，對(duì)全人類(lèi)生命健康造成巨大威脅。該病毒通過(guò)刺突蛋白（Spike protein,S）受體結(jié)合域（Receptor Binding Domain,RBD）識(shí)別細(xì)胞表面受體-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶?2（Angiotensin I Converting Enzyme 2,ACE2）并與其結(jié)合，在相關(guān)蛋白協(xié)助和介導(dǎo)下侵染細(xì)胞。

本試劑盒可檢測(cè)的中和抗體為針對(duì)S蛋白并且可以阻斷其與ACE2結(jié)合的抗體；本試劑盒可以檢測(cè)任何物種體液中針對(duì)S蛋白的中和抗體。

本試劑盒預(yù)包被酶標(biāo)板上通過(guò)共價(jià)固定S蛋白R(shí)BD片段，其可以與HRP-ACE2偶聯(lián)物特異性結(jié)合，然后通過(guò)TMB在HRP-ACE2偶聯(lián)物的HRP酶催化下顯色；如果待檢測(cè)樣本或者標(biāo)準(zhǔn)品中含有針對(duì)S蛋白中和抗體會(huì)阻斷HRP-ACE2偶聯(lián)物與固定的RBD片段的結(jié)合，因此中和抗體含量與TMB顯色值呈負(fù)相關(guān)。

本試劑盒可檢測(cè)血清、血漿或其他體液中針對(duì)S蛋白的中和抗體，不受待檢樣品種屬和抗體亞型的限制。

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雖然本試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)濃度，但是由于不同中和抗體親和力不同，所以參照本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)算的中和抗體濃度為相對(duì)濃度，因此稱(chēng)為半定量。

試劑盒組成：

儲(chǔ)存方法：

請(qǐng)按各個(gè)組分對(duì)應(yīng)的溫度存儲(chǔ)，該試劑盒在各組分未拆封的情況下，自生產(chǎn)之日起可存放6個(gè)月以上。

試劑準(zhǔn)備:

1.從冰箱中取出所有試劑，在使用前平衡至室溫（20℃至?25℃）。 未用完后的所有試劑保存在冰箱中。

2.使用前應(yīng)將所有樣品和對(duì)照品進(jìn)行離心。

3.HRP-ACE2工作液：將HRP-ACE2偶聯(lián)復(fù)合物（100×）用??通用稀釋液按?1：100進(jìn)行稀釋?zhuān)礊?/span>HRP-ACE2工作液；

4.洗滌液：將?濃縮洗滌液（25×）用?ddH2O?以體積比?1:24?進(jìn)行稀釋?zhuān)ㄏ♂?5倍），即為洗滌液。

注意：如濃縮洗滌液（25×）中有沉淀，請(qǐng)?jiān)谒。ㄗ罡?50℃）中溫育、混合至沉淀溶解。

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中和抗體標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照品和待檢樣品的準(zhǔn)備

1.???將中和抗體標(biāo)準(zhǔn)品用?通用稀釋液?做連續(xù)2倍倍比稀釋?zhuān)♂尯?span style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-weight: 700;">中和抗體標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為10ug/ml, 5ug/ml, 2.5ug/ml, 1.25ug/ml, 0.625ug/ml, 0.313ug/ml, 0.156ug/ml,

2.???陰性對(duì)照品用?通用稀釋液?以體積比 1:9 進(jìn)行稀釋?zhuān)聪♂?0倍。

例如，50μL 樣品加入450μL?通用稀釋液。

3.???將待檢樣品用通用稀釋液以體積比 1:9 進(jìn)行稀釋?zhuān)聪♂?0倍。

例如，10μL 測(cè)試樣品加入90μL?通用稀釋液。?

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預(yù)包被酶標(biāo)板準(zhǔn)備及加樣順序安排

1.?設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、陰性對(duì)照品孔和待檢樣品孔，最好做兩個(gè)平行重復(fù)孔，有條件的可以做三孔平行重復(fù)。

2.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品孔、陰性對(duì)照品孔和待檢樣品孔的數(shù)量摳取所需酶標(biāo)板孔條（有條件的可以考慮樣品做三次平行重復(fù)）。 確保板孔條牢固地卡入板框，未使用的板孔條及時(shí)裝入有干燥劑鋁箔袋密封-20℃保存。

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檢測(cè)操作步驟

1、?將稀釋好的中和抗體標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照和待檢測(cè)樣品，依次加入酶標(biāo)板孔，每孔50ul；

加入標(biāo)準(zhǔn)品孔的標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：10ug/ml, 5ug/ml, 2.5ug/ml, 1.25ug/ml, 0.625ug/ml, 0.313ug/ml, 0.156ug/ml,?陰性對(duì)照品

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2.以上每孔中再立即加入HRP-ACE2工作液，每孔50ul,加完后震蕩儀輕輕混勻；

3.用酶標(biāo)板膜覆封蓋板孔，在 37℃ 下孵育 60 分鐘；

4.取下平板密封膜，用 350μL 的 洗滌液 洗滌酶標(biāo)板孔 3 次；

5.洗滌完畢后在吸水紙上拍干孔內(nèi)液體；

6.每孔立即加入100uL?TMB底物液，室溫顯色10-15分鐘，待其顯色穩(wěn)定后立即在每孔加入50uL底物反應(yīng)終止液

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吸光值讀?。?/span>

提前10分鐘打開(kāi)酶標(biāo)儀，待其預(yù)熱穩(wěn)定后方可使用。

將顯色反應(yīng)終止的酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀，設(shè)定好檢測(cè)波長(zhǎng)450nm(最好設(shè)置雙波長(zhǎng)：以450nm為吸光波長(zhǎng)， 630nm為參考波長(zhǎng))；

TMB底物反應(yīng)時(shí)間與溫度有關(guān)，比較適宜溫度為25℃左右；溫度太低，反應(yīng)速度慢，溫度高，背景較深，邊緣效應(yīng)嚴(yán)重。

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待測(cè)樣品中和抗體濃度計(jì)算：

通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及其對(duì)應(yīng)OD值建立標(biāo)準(zhǔn)品曲線，將待檢樣品OD值代入擬合曲線公式計(jì)算待檢樣品中中和抗體濃度。

1.??可以使用Curve Expert繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且通過(guò)其擬合曲線公式進(jìn)行樣品濃度計(jì)算；

2.??當(dāng)檢測(cè)樣品OD值或者標(biāo)準(zhǔn)品OD值高于陰性對(duì)照品OD值時(shí)，應(yīng)該予以舍棄，不予納入計(jì)算，此可能為樣品個(gè)體差異所引起的干擾。試劑盒所使用的通用稀釋液為標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，與復(fù)雜的體液環(huán)境還是有一定差異，所以只有OD值低于陰性對(duì)照品的OD值才納入計(jì)算范圍。

典型數(shù)據(jù)：