產品介紹：

2019年低，嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）開始肆虐全球，對全人類生命健康造成巨大威脅。該病毒通過刺突蛋白（Spike protein,S）受體結合域（Receptor Binding Domain,RBD）識別細胞表面受體-血管緊張素轉化酶?2（Angiotensin I Converting Enzyme 2,ACE2）并與其結合，在相關蛋白協助和介導下侵染細胞。

本試劑盒可檢測的中和抗體為針對S蛋白并且可以阻斷其與ACE2結合的抗體；本試劑盒可以檢測任何物種體液中針對S蛋白的中和抗體。

本試劑盒預包被酶標板上通過共價固定S蛋白RBD片段，其可以與HRP-ACE2偶聯物特異性結合，然后通過TMB在HRP-ACE2偶聯物的HRP酶催化下顯色；如果待檢測樣本或者標準品中含有針對S蛋白中和抗體會阻斷HRP-ACE2偶聯物與固定的RBD片段的結合，因此中和抗體含量與TMB顯色值呈負相關。

本試劑盒可檢測血清、血漿或其他體液中針對S蛋白的中和抗體，不受待檢樣品種屬和抗體亞型的限制。

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雖然本試劑盒中標準品為標準濃度，但是由于不同中和抗體親和力不同，所以參照本試劑盒標準品測算的中和抗體濃度為相對濃度，因此稱為半定量。

試劑盒組成：

儲存方法：

請按各個組分對應的溫度存儲，該試劑盒在各組分未拆封的情況下，自生產之日起可存放6個月以上。

試劑準備:

1.從冰箱中取出所有試劑，在使用前平衡至室溫（20℃至?25℃）。 未用完后的所有試劑保存在冰箱中。

2.使用前應將所有樣品和對照品進行離心。

3.HRP-ACE2工作液：將HRP-ACE2偶聯復合物（100×）用??通用稀釋液按?1：100進行稀釋，即為HRP-ACE2工作液；

4.洗滌液：將?濃縮洗滌液（25×）用?ddH2O?以體積比?1:24?進行稀釋（稀釋25倍），即為洗滌液。

注意：如濃縮洗滌液（25×）中有沉淀，請在水?。ㄗ罡?50℃）中溫育、混合至沉淀溶解。

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中和抗體標準品、陰性對照品和待檢樣品的準備

1.???將中和抗體標準品用?通用稀釋液?做連續2倍倍比稀釋，稀釋后中和抗體標準品濃度依次為10ug/ml, 5ug/ml, 2.5ug/ml, 1.25ug/ml, 0.625ug/ml, 0.313ug/ml, 0.156ug/ml,

2.???陰性對照品用?通用稀釋液?以體積比 1:9 進行稀釋，即稀釋10倍。

例如，50μL 樣品加入450μL?通用稀釋液。

3.???將待檢樣品用通用稀釋液以體積比 1:9 進行稀釋，即稀釋10倍。

例如，10μL 測試樣品加入90μL?通用稀釋液。?

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預包被酶標板準備及加樣順序安排

1.?設置標準品孔、陰性對照品孔和待檢樣品孔，最好做兩個平行重復孔，有條件的可以做三孔平行重復。

2.根據標準品孔、陰性對照品孔和待檢樣品孔的數量摳取所需酶標板孔條（有條件的可以考慮樣品做三次平行重復）。 確保板孔條牢固地卡入板框，未使用的板孔條及時裝入有干燥劑鋁箔袋密封-20℃保存。

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檢測操作步驟

1、?將稀釋好的中和抗體標準品、陰性對照和待檢測樣品，依次加入酶標板孔，每孔50ul；

加入標準品孔的標準品濃度依次為：10ug/ml, 5ug/ml, 2.5ug/ml, 1.25ug/ml, 0.625ug/ml, 0.313ug/ml, 0.156ug/ml,?陰性對照品

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2.以上每孔中再立即加入HRP-ACE2工作液，每孔50ul,加完后震蕩儀輕輕混勻；

3.用酶標板膜覆封蓋板孔，在 37℃ 下孵育 60 分鐘；

4.取下平板密封膜，用 350μL 的 洗滌液 洗滌酶標板孔 3 次；

5.洗滌完畢后在吸水紙上拍干孔內液體；

6.每孔立即加入100uL?TMB底物液，室溫顯色10-15分鐘，待其顯色穩定后立即在每孔加入50uL底物反應終止液

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吸光值讀?。?/span>

提前10分鐘打開酶標儀，待其預熱穩定后方可使用。

將顯色反應終止的酶標板放入酶標儀，設定好檢測波長450nm(最好設置雙波長：以450nm為吸光波長， 630nm為參考波長)；

TMB底物反應時間與溫度有關，比較適宜溫度為25℃左右；溫度太低，反應速度慢，溫度高，背景較深，邊緣效應嚴重。

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待測樣品中和抗體濃度計算：

通過標準品濃度及其對應OD值建立標準品曲線，將待檢樣品OD值代入擬合曲線公式計算待檢樣品中中和抗體濃度。

1.??可以使用Curve Expert繪制標準曲線，并且通過其擬合曲線公式進行樣品濃度計算；

2.??當檢測樣品OD值或者標準品OD值高于陰性對照品OD值時，應該予以舍棄，不予納入計算，此可能為樣品個體差異所引起的干擾。試劑盒所使用的通用稀釋液為標準稀釋液，與復雜的體液環境還是有一定差異，所以只有OD值低于陰性對照品的OD值才納入計算范圍。

典型數據：