β-木糖苷酶（β- xylosidase）測定試劑盒說明書
微量法
英文名稱：Β-xylosidase activity assay kit
關鍵詞:β-木糖苷酶|β-木糖苷酶活性檢測|木糖苷酶
貨號：BC2625
規格：100T/48S

產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
標準液：液體1ml×1支，4℃保存，10μmol/ml對**ben酚溶液。

產品說明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶，產物木糖可作為碳源應用于微生物發酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業，比傳統的漂白法環保，具有廣泛的應用價值。

β-木糖苷酶催化對**ben酚-β-D-木糖苷產生對**ben酚，對**ben酚在 405nm 處有特征吸收峰，測定 405nm 光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。

自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>
1. 植物樣本：稱取約 0.1g 樣品，加 1mL 提取液充分冰浴勻漿，然后 12000rpm，4℃，離心 20min，
棄沉淀 ，取 20μL 上清測定蛋白含量，剩余上清作為待測酶液。
2. 細菌、真菌樣本：收集約 500 萬個細胞，加入 1mL 提取液，超聲波破碎（冰浴，功率 300w，超
聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000rpm，4℃，離心 10min，棄沉淀 ，取 20μL 上清
測定蛋白含量，剩余上清置于冰上待測。
3. 標準液的處理：用試劑二將標準液稀釋至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。
二、測定操作表：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm，對照管調零。
2、操作表
對照管 測定管 標準管
酶液（μL） ?????40????40 ????40
試劑一（μL） ?????????10
試劑二（μL）????80 ???70?????80
混勻，45℃水浴 20min
試劑三（μL） ???80????80 ????80
混勻，靜置 5min，對照管調零， 微量石英比色皿/96 孔板，測定 405nm 吸光值，記為 A405。

β-木糖苷酶活性計算公式：
根據標準管的吸光度（x）和濃度（y，μmol/ml）建立標準曲線，將△A帶入標準曲線中，計算樣品生成的產物量（μmol/ml）。
1、按蛋白含量計算
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每毫克蛋白質 1min 內催化產生 1 mol 對**ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min / mg prot）=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr
2、按樣本質量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每克樣品 1min 內催化產生 1 mol 對**ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /g）＝(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=0.25×y ÷W
3. 按細胞數量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4 時，每 10
4個細胞 1min 內催化產生 1 mol 對**ben酚的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /104cell）= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0005×y

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
V 反總：反應體系總體積，0.2mL；
V 樣：加入反應體系中
樣本體積，0.04mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣本質量，g； 
500：細胞或細菌總數，500 萬；
T：反應時間，20min。

注意事項：
1、 吸光度變化應該控制在 0.05~0.6 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。
2、 樣品蛋白質含量需要另外測定，可選用考馬斯亮藍法蛋白含量測定試劑盒進行測定