小鼠單氨氧化酶A（MAOA）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供體外研究使用
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預期應用
ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中MAOA含量。

實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗MAOA抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗MAOA抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MAOA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制
1.?酶聯板：一塊（96孔）
2.?標準品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為400 U/L，做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）后，分別稀釋400 U/L，200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 U/L，臨用前15分鐘內配制。
如配制200 U/L標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）400 U/L的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3.?樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4.?檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。
5.?檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6.?檢測溶液A：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
7.?檢測溶液B：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8.?底物溶液：1×10ml/瓶。
9.?濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.?終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11.?覆膜：1×5張

標本的采集及保存
1.? 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.? 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過3個月，-80℃不應超過6個月；標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測；高血脂的標本不需進行特殊處理，可直接檢測。

操作步驟
實驗開始前，請提前配制好所有試劑；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，均應用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實驗室在操作前先進行預實驗以建立最佳稀釋倍數。
1.?加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.?棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
3.?溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4.?每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃，60分鐘。
5.?溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
6.?依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.?依序每孔加終止溶液50ul，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.?用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。