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產(chǎn)品名稱：大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)Elisa試劑盒
產(chǎn)品存儲(chǔ)：2-8℃
有 效 期：6個(gè)月
實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入樣本，再與HRP標(biāo)記的)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中指標(biāo)濃度。?
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)Elisa試劑盒組成:
1,30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 ? ? ? ? 7,終止液 ? ? ? ? ? ? ? 6ml×1瓶
2,酶標(biāo)試劑 ? ? ?6ml×1瓶 ? ? ? ? 8,標(biāo)準(zhǔn)品 ? ? ? ? ? ? ? 0.5ml×1瓶
3,酶標(biāo)包被板 ? ? 12孔×8條 ? ? ? ? 9,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液? ? ?1.5ml×1瓶
4,樣品稀釋液 ? ?? 6ml×1瓶 ? ? ? ?10,說明書 ? ? ? ? ? ? ?1份
5,顯色劑A液 ??? ?6ml×1瓶 ? ? ? ?11,封板膜 ? ? ? ? ? ? ?2張??
6,顯色劑B液 ? ?? 6ml×1/瓶 ? ? ? ?12,密封袋 ? ? ? ? ? ? ?1個(gè)
標(biāo)本要求?
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)Elisa試劑盒操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品:150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品:150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品:150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品:150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品:150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。? ?
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。?
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)Elisa試劑盒計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。??
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