SILAC定量蛋白質(zhì)組
產(chǎn)品名稱： SILAC定量蛋白質(zhì)組
英文名稱： SILAC quantitative proteomics
產(chǎn)品編號(hào)：
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： null
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2002年，丹麥Mann實(shí)驗(yàn)室的OngSE等對(duì)AACT技術(shù)作了進(jìn)一步改進(jìn)，建立了SILAC技術(shù)并首次應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組研究，為全面、系統(tǒng)地定性和定量分析復(fù)雜哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白質(zhì)組提供了有效的方案。
技術(shù)原理 SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸完全摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。屬于體內(nèi)代謝標(biāo)記法。 圖：SILAC定量蛋白質(zhì)組的實(shí)驗(yàn)流程 技術(shù)特點(diǎn) l? SILAC是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸與天然氨基酸化學(xué)性質(zhì)基本相同，所標(biāo)記的細(xì)胞和未標(biāo)記細(xì)胞在生物學(xué)行為上幾乎沒(méi)有差異，標(biāo)記效率可高達(dá)100％。 l? 采用質(zhì)譜定量，定量結(jié)果準(zhǔn)確且批次變異小、重復(fù)性好。 l? 體內(nèi)代謝標(biāo)記與SDS-PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質(zhì)限制。 l? 多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響一致，減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備產(chǎn)生的影響。 l? 由于該技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記，標(biāo)記效果穩(wěn)定，其標(biāo)記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進(jìn)行全細(xì)胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。 l? 與化學(xué)標(biāo)記相比，SILAC方法蛋白需要量明顯減少，通常每個(gè)樣品只需要幾十微克的蛋白量。 l? 活體標(biāo)記，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。 l? 只適用于活體培養(yǎng)的細(xì)胞，對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中常用的組織樣品，體液樣品等無(wú)法分析，對(duì)于動(dòng)物模型的標(biāo)記成本太大，無(wú)法實(shí)現(xiàn)。 應(yīng)用 l? 多個(gè)樣品全細(xì)胞蛋白或亞細(xì)胞蛋白的差異比較。 l? 同一樣品不同條件下全細(xì)胞蛋白或亞細(xì)胞蛋白的差異比較。 l? 將SILAC與IP技術(shù)相結(jié)合，可用于研究特定蛋白質(zhì)的相互作用蛋白分析。 l? 通過(guò)對(duì)質(zhì)譜譜圖的解讀，可進(jìn)行磷酸化位點(diǎn)的確認(rèn)和磷酸化蛋白的定量分析等。 客戶須知 我公司不提供樣本前處理服務(wù)，客戶需自行進(jìn)行標(biāo)記和細(xì)胞傳代，標(biāo)記細(xì)胞樣本需要能傳代5代以上的才能進(jìn)行SILAC實(shí)驗(yàn)。 ?
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