一、產品介紹

1．產品背景

Frdbio® Fluor熒光染料為活性熒光染料，該系列包括從紫外、可見光譜到近紅外光譜常見熒光染料，用于標記生物分子，特別是蛋白質和核酸。對核心結構的創新性修改使得Frdbio® Fluor染料優于具有許多創新新穎特征的其他商業染料，主要表現在標記效率更高，發光度更強。

Frdbio®Fluor770是一種熒光染料，其激發波長和發射波長分別為783nm和758nm，它與抗體形成更特異的抗體熒光素結合物，背景較更低。

2．基本原理

本試劑盒主要通過熒光素集團的活性鍵與生物分子的游離氨基共價結合，可以用于標記抗體，蛋白，。本試劑盒種所提供的熒光染料都為預先活化，可以直接用于標記實驗。標記產物可以放置在 4?C至少保存6個月以上。

本試劑盒常常被用于一抗的直接標記，主要優點是省卻了二抗的使用和其所帶來的操作步驟。

二、主要信息

1．試劑盒已經提供的材料：

活化的Frdbio® Fluor770溶液: 已活化，可直接用于標記 1支.

Frdbio® Fluor770標記緩沖液: 優化最適標記反應. 1 支.

純化超濾管: 1支.

注意：試劑盒中所配超濾管標示的截留分子量必須小于待標記分子分子量2倍以上

本試劑盒主要有以下幾種規格：

· 100 μg (1 x 100 μg), 可以用于50μg-150μg抗體標記1次，最佳標記量為100μg。

· 300 μg (300 μg), 可以用于150μg-450μg抗體標記1次，每次最佳標記量為450μg。

· 1mg (1 x 1mg), 可以用于500μg-1500μg抗體標記1次，每次最佳標記量為1000μg。

2．其他需要自備材料：

• 待標記的生物分子

• 移液器及吸頭.

• 去離子水.

• PBS (pH 7.4)

3．試劑盒儲存

試劑盒放在-20?C可保存6個月以上。.

三、試劑盒使用操作流程

1．試劑準備

待標記的生物分子與熒光素最佳摩爾比例為1:8-1:22,本試劑盒推薦最佳比例為1:15； 為了獲得最佳的摩爾比例，可以要通過預實驗進行摸索。以抗體標記為例，推薦量如下。最佳標記體系應保證抗體的濃度為2mg/ml，標記時終濃度不低于1mg/ml。對于其他標記量，參照表按等比例調整抗體的體積和用量。

2．樣品準備

待標記的分子濃度不低于2 mg/ml，如果濃度較低，需在實驗之前濃縮到2mg/ml以上；待標記的分子需要溶解在符合以下要求的緩沖液中，如果符合以下要求可以直接進行標記，如果不符合請將溶液置換（透析或者超濾）到符合要求的溶液中在進行標記實驗。

溶液中一定不能含有游離氨基，否則會影響標記效率。

3．操作流程(以標記100ug抗體為例,2mg/ml)

1). 取5 μl Frdbio® Fluor770標記緩沖液，加入到上述準備好的待標記抗體溶液中，用移液器輕輕混勻

2). 打開活化的Frdbio® Fluor770溶液蓋子，取2.5 μl加入到步驟1的溶液中，去離子水補足到50 μl，輕輕混勻，37°C 避光反應1小時。

3). 反應完畢，將適量的PBS（約450u L）加入到步驟2的混合溶液中，輕輕混勻并將溶液移至超濾管，4°C 12000離心10min。

4) .將超濾管芯內溶液輕輕混勻并吹打管心內壁，并轉移到一干凈離心管中即為熒光素標記產物。

4．標記產物的保存

根據實驗需要調整到合適的濃度，可加入適量BSA，甘油及防腐劑等，分裝成小分-20°C避光保存。

四、技術支持

常見問題及解決辦法

Q: 待標記分子經過濃縮濃度仍然達不到2 mg/ml，再濃縮就產生沉淀了怎么辦?

A: 標記的時候盡可能達到這個濃度，如果實在達不到這個濃度，步驟2不需要再補足去離子水，適當增加加入的活化的熒光素的量；最佳標記效果可以梯度增加熒光素用量試驗測試來確定。

Q: 待標記分子與熒光素的最佳摩爾比只能是1:8 - 1:22之間？

A: 這個要根據不同生物分子性, 質確定，更準確, 的說與生物分子表面氨基個數有關系；最佳標記比例可根據梯度用量測試確定。

Q: 如果選擇標記試劑盒中的超濾管型號?

A: 一般來說，您待標記生物分子的分子量是超濾管截留分子量的2倍以上最好；比如，標記抗體，抗體分子量為150Kd,選擇分子截留75kD以下的都可以，分子量截留越小，超濾越慢。如果分子量太小，標記完以后建議用更高精度的純化方式，比如，10kD分子量建議用HPLC純化

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