DuGreen 核酸染料（10,000× 水溶液）
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DuGreen 核酸染料特點
● 無毒性：DuGreen 獨特的油性和大分子量特點使其不能穿透細胞膜進入細胞內(nèi)，艾姆斯氏試驗???
??? 結(jié)果也表明，該染料的誘變性遠小于EB。
● 靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。
● 穩(wěn)定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強。
● 信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。
● 操作簡單：在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解；而電泳后染色過程也只需? 30 分鐘且無需脫色或沖洗 ，即可直接用可見光凝膠透射儀觀察。
● 適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 與標準凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置完美兼容：適用于使用254nm 激發(fā)的紫外凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置。
DuGreen 使用方法簡介
1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）
（1） 制膠時加入DuGreen 核酸染料。（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL DuGreen? 10,000× 儲液，以此比例類推）。
（2） 按照常規(guī)方法進行電泳。
注意事項：
u?????? 此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
u?????? 由于DuGreen 具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將DuGreen 儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。DuGreen 兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
u?????? 含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
u?????? 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。
u?????? 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
2．泡染法
（1） 按照常規(guī)方法進行電泳。
（2） 用H2O將DuGreen 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如將15μL DuGreen 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。
（3） 將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右。
注意事項：
u?????? 用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
u?????? 3× DuGreen 染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
幾種核酸染料比較
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名稱 |
靈敏度 |
穩(wěn)定性 |
對DNA遷移的影響 |
安全性 |
適用性 |
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DuRed |
高 |
高 |
條帶不彎曲，DNA片段不遷移 |
①???? 是一種獨特的油性大分子，不易揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi)，安全無毒。
②???? 艾姆斯氏測試結(jié)果表明，DuRed在凝膠染色濃度下完全沒有誘變性，因此完全沒有致癌毒性。 |
通用大小片段電泳染色，與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標準的EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激發(fā)。 |
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DuGreen |
高 |
高 |
條帶不彎曲，DNA片段不遷移 |
①? 是一種獨特的油性大分子，不易揮發(fā)升華，不易吸入人體，不能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi)，安全無毒。
②? 艾姆斯氏測試結(jié)果表明，DuGreen在凝膠染色濃度下完全沒有誘變性，因此完全沒有致癌毒性。 |
通用大小片段電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
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SYBR Green I |
高 |
低 |
染料濃度較高時，條帶容易彎曲，DNA片段遷移的現(xiàn)象明顯 |
屬花箐染料，能透過細胞膜進入活體細胞內(nèi)，但容易生物降解，不會在體內(nèi)殘留，安全無毒。 |
100bp以上電泳染色，適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
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EB |
低 |
高 |
條帶不彎曲，DNA片段不遷移 |
①? 分子量小，易揮發(fā)升華，易吸入人體，不易生物降解，在體內(nèi)長期殘留。
②? 艾姆斯氏測試結(jié)果表明，EB容易引起有機體突變，是一種強誘變劑，具有高致癌性。 |
100bp以上電泳染色，背景熒光信號高；使用普通紫外凝膠透射儀觀察。 |
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Goldview |
低 |
高 |
條帶不彎曲，DNA片段不遷移 |
①? 主要成分為吖啶橙，是一種煤焦油提取物，具有高毒，致癌，高誘變性。
②? 易揮發(fā)升華，易吸入人體，能穿透細胞膜進入活體細胞內(nèi)，不易生物降解，在體內(nèi)長期殘留。 |
100bp以上電泳染色，背景熒光信號高；適用于使用254nm激發(fā)的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
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特別提醒：
u?????? 如果您使用的是紫外成像儀，請選擇DuRed；如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測，請選擇 DuGreen。盡管在凝膠染色方面，DuGreenTUNEology 波長可調(diào)檢測卡盒-->
