可示蹤qPCR染料法預(yù)混液（高ROX）
產(chǎn)品名稱(chēng)： 可示蹤qPCR染料法預(yù)混液（高ROX）
英文名稱(chēng)： 2× Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)
產(chǎn)品編號(hào)： N132136
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國(guó)
品牌商標(biāo)： Arcegen
更新時(shí)間： 2025-06-12T14:32:31
使用范圍： null
| 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| 100T（20μL/rxn)-1ml | 150.0 |
| 500T（20μL/rxn)-5ml | 600.0 |
- 聯(lián)系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號(hào)1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2×Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增預(yù)溶液，熒光強(qiáng)度高，靈敏度高和特異性強(qiáng)，擴(kuò)增產(chǎn)量高。核心組分Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動(dòng)，可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過(guò)程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增；還添加了提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子，使定量PCR可以在寬泛的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
本產(chǎn)品利用不同染料的混合變色反應(yīng)來(lái)監(jiān)控移液操作，有效減少了移液誤差的發(fā)生。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
N132136E |
N132136S |
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規(guī)格 |
100 T（20 μL/rxn） |
500 T（20 μL/rxn） |
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱(chēng) |
N132136E |
N132136S |
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N132136-A |
2×Color qPCR Master Mix (High Rox) |
1 mL |
5×1 mL |
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N132136-B |
10×Dilution Buffer |
1 mL |
1 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃避光保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 使用前請(qǐng)上下顛倒以混勻Master Mix，請(qǐng)勿vortex避免產(chǎn)生氣泡，影響定量結(jié)果。Master Mix經(jīng)混勻短暫離心后即可使用。加樣過(guò)程中吹打要輕，如果操作不慎Master Mix起泡，需再次離心方可使用。
4. 由于本品檢測(cè)靈敏度極高，易被空氣中氣溶膠污染。因此反應(yīng)體系配制時(shí)請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，配制過(guò)程中請(qǐng)使用滅菌槍頭、反應(yīng)管，條件容許的實(shí)驗(yàn)室推薦使用專(zhuān)用的移液槍和帶濾芯的槍頭。
5. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（Cat#N132062），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
6. 本產(chǎn)品僅用于科研。
使用說(shuō)明
1. 模板處理
2× Color qPCR Fluore Green Master Mix (High Rox)中包含藍(lán)色染料，10×Dilution Buffer為專(zhuān)用黃色濃縮模板稀釋液。使用過(guò)程中，如需要進(jìn)行模板示蹤，則需稀釋到1X作為模板稀釋液使用，然后進(jìn)行qPCR檢測(cè)；如不需要進(jìn)行模板示蹤，則不使用Dilution Buffer即可。
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模板類(lèi)型 |
10×Dilution Buffer使用方式* |
Dilution Buffer終濃度 |
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cDNA溶液、溶解的質(zhì)粒、基因組 |
若要稀釋模板，則先使用無(wú)菌超純水將模板稀釋至目標(biāo)濃度，后在每9 μL模板中加入1 μL 10×Dilution Buffer。 |
1× |
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DNA粉末 |
使用無(wú)菌超純水將10×Dilution Buffer 稀釋至1×，使用合適體積的1×Dilution Buffer作溶劑溶解對(duì)應(yīng)的DNA粉末。 |
1× |
【注】：*實(shí)際使用過(guò)程中也可按需使用其他方案，保證最終模板中Dilution Buffer濃度為1×即可。
2. 推薦qPCR反應(yīng)體系
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組分 |
體積 （μL）*** |
體積 （μL）*** |
終濃度 |
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2×Color qPCR Master Mix (High Rox) |
25 |
10 |
1× |
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Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
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模板DNA/cDNA** |
x |
x |
- |
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無(wú)菌超純水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
- |
【注】：
*通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
**如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的1/10，最佳模板加入量以保證擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為宜。
***推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性；上機(jī)前需充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
3. 反應(yīng)程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
95℃ |
2 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
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退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** |
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熔解曲線階段* |
儀器默認(rèn)設(shè)置 |
1 |
|
【注】：
*退火溫度和時(shí)間：請(qǐng)根據(jù)引物TM值和目的基因的長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)整。
**熒光信號(hào)采集：請(qǐng)勿忘記打開(kāi)熒光信號(hào)采集，按照儀器使用說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置。
***熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
4. 引物設(shè)計(jì)指南
1) 推薦引物長(zhǎng)度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
2) 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過(guò)2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3) 引物堿基分布均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
4) 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
5) 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對(duì)。避免引物 3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
6) 設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測(cè)，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
5. 適用機(jī)型
本產(chǎn)品中預(yù)混了用以校正孔與孔之間熒光信號(hào)誤差的ROX Reference Dye 1 (高濃度)，適用于以下熒光定量PCR儀：
Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus;
以及其他需要添加高濃度ROX Reference Dye的熒光定量PCR儀。