?正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

淀粉是植物中糖的主要儲存形式，其含量測定對于評價食品營養價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。

測定原理：

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量，即可計算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96?孔板、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 35mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；

淀粉提取：

1、稱取0.1~0.2g?樣本（建議稱取約 0.1g 樣本）于研缽中研碎，加入1mL?試劑一，充分勻漿后轉移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀。

2、沉淀中加入0.5mL?蒸餾水，放入95℃水浴中糊化 15min（蓋緊，以防止水分散失）。

3、冷卻后，加入 0.35mL 試劑二，25℃常溫提取 15min，振蕩 3-5 次。

4、加入 0.85mL 蒸餾水，混勻，3000g，25℃離心 10min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 620nm，蒸餾水調零。

2、調節水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入 3.75mL 蒸餾水后，緩慢加入 21.25mL 濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；

4、樣本測定：取50μL?樣本和250μL?工作液至EP?管中，95?度水浴10?min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取200uL?至微量石英比色皿或96?孔板中，在620 nm?波長下記錄測定吸光度值A。

淀粉含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y?=5.872x-0.0295；x?為標準品濃度（mg/mL），y?為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7?mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y=2.936x-0.0295；x?為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7?mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意 ：由于工作液具有強腐蝕性，請謹慎操作。

若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計算公式中乘以相應的稀釋倍數。提取液的配置：0.35mL?試劑二+1.35mL?水。用多少按照此比例配多少。

最低檢測限為 10μg/g 鮮重或 100ng/mgprot 。