產品說明
唾液酸一類九碳酸性單糖的N-或O-衍生物總稱。這些糖中最常見的成員是N-乙酰神經氨酸(NANA)。?唾液酸廣泛分布在哺乳動物組織和體液(如血清)中。唾液酸寡糖已被證實具有抗病毒特性，還會影響血液凝固和膽固醇水平。?體液中唾液酸的含量也是診斷癌癥的重要指標。簡單、直接和自動化測量唾液酸濃度的方法應用廣泛。BioAssay?Systems用一種酶反應的工作試劑檢測樣品中唾液酸的含量。反應產物在570nm的光密度或熒光強度(585/530nm)與樣品中唾液酸的濃度成正比。
產品特點
靈敏、準確：僅用10μL樣品，檢測范圍：比色法0.02-1?mM，熒光法2-100?μM唾液酸。
簡單、方便：使用一種工作試劑，室溫下反應60分鐘可測游離唾液酸；或通過水解處理得到總唾液酸含量。
產品用途
直接檢測：生物樣品中唾液酸含量。
試劑盒組成
緩沖液：??mL
顯色劑?：120?mL
酶試劑：120?mL
標準品：500?mL10?mM
水解試劑：10?mL???????
中和試劑：5?mL
儲藏條件：該試劑盒用冰袋運輸。所有組份在-20°C下保存。保質期3個月。
預防措施：本產品僅供研究用。使用過程中嚴格遵循實驗安全措施。
唾液酸水解步驟
注意：測量游離唾液酸不需此步驟。
1、將20?mL樣本和80?mL水解液混合加入離心管中。在80°C下反應60分鐘。
2、讓樣品冷卻到室溫并在14000轉/分的轉速下離心1分鐘。
3、在每個水解反應管中加20?mL中和試劑,?混勻，在14000轉/分的轉速下離心幾秒。樣品可用于總唾液酸的檢測。
比色法測試
注意：含有巰基的試劑(如：巰基乙醇、二硫蘇糖醇)會干擾反應，在樣品準備過程中避免使用。
1、將所有組分放置至室溫。酶試劑置冰上或冰箱中。?混合50mL?10mM的標準品和450mL蒸餾水得到1mM標準液。按照下表加入蒸餾水稀釋標準液。
No
Premix?+?H2O
Vol?(mL)
Sialic?Acid?(mM)
1
100mL?+???0mL
100
1.0
2
?60mL?+??40mL
100
0.6
3
?30mL?+??70mL
100
0.3
4
??0mL?+?100mL
100
?0
轉移10?μL稀釋后的標準液和10?μL樣品到平底透明的96孔板的不同孔中。
2、?配制足夠的工作試劑。對于每個反應孔，混合93μL緩沖液,?1μL顯色劑和1μL酶試劑。在每個孔內加入90μL工作試劑。輕擊平板混勻。
、室溫下反應60分鐘。在570nm?(550-585nm)讀吸光值。注意：若樣品的OD值高于1mM標準液的OD值，用水稀釋樣品重新測試，將得到的結果乘以稀釋倍數n。
濃度計算
標準品吸光值減去空白對照的吸光值?(#4)，得出標準曲線的斜率(Slope)，計算樣品唾液酸的濃度。
ODSAMPLE和ODH2O是樣品和水的吸光值，n是稀釋倍數(水解樣品n?=?6)。
單位換算：1?mM?NANA?=?30.9?mg/dL?或?309?ppm。
熒光法測試
1、熒光法的線性范圍是2-100?μM唾液酸。將比色法的標準液以1:10的比例稀釋。?轉移10?μL稀釋后的標準液和10?μL樣品到黑色96孔板的不同孔中。
2、在每個孔內加入90μL工作試劑(見比色法的步驟)，輕敲平板混勻試劑。
3、在常溫下反應60分鐘并在λex?=?530nm和λem?=?585?nm處讀熒光強度。
如果在384孔板測試，用5μL標準液和45μL工作試劑。
計算樣品唾液酸的濃度：
FSAMPLE和FH2O是樣品和水的熒光強度，n是稀釋倍數。
實驗必需品(未提供)
移液裝置，離心管，透明平底96孔板，光密度閱讀儀，黑色平底96孔板或384孔板，熒光板閱讀儀。
參考文獻
[1].?Sugahara,?K.?et?al.?(1980).?Enzymatic?Assay?of?Serum??Sialic?Acid.?Clinica?Chimica?Acta?108:493-8.
[2].?Simpson,?H.?et?al.?(1993).?Serum?sialic?acid?enzymatic??assay?based?on?microtitre?plates:?application?for?measuring??capillary?serum?sialic?acid?concentrations.?Br?J?Biomed?Sci.?50:164-7.