Vaccinia Capping Enzyme
產(chǎn)品名稱： Vaccinia Capping Enzyme
英文名稱： Vaccinia Capping Enzyme
產(chǎn)品編號： Frd00031
產(chǎn)品價格： 100ul/2180
產(chǎn)品產(chǎn)地：
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時間： 2023-12-26T11:12:59
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
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Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL) 產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
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Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL) |
FrdE00031 |
100/1000 μL |
產(chǎn)品概述
牛痘病毒加帽酶是由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷酰基轉(zhuǎn)移酶活性和鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶活性。該酶作用于體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，可將7-甲基鳥嘌呤帽結(jié)構(gòu)（m7Gppp）連接到RNA的5'末端，形成帽子結(jié)構(gòu)（m7Gppp5'N），該結(jié)構(gòu)對于mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運和翻譯過程具有重要作用。加帽反應(yīng)在一小時之內(nèi)完成，效率接近100%，并且保證正確的方向。
保存及運輸條件
-30~-15℃保存，干冰運輸。
產(chǎn)品基本信息
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產(chǎn)品名稱 |
Vaccinia Capping Enzyme |
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來源 |
E.coli |
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儲存緩沖液 |
20mM Tris-HCl pH8.0; 100mM NaCl; 1mM DTT; 0.1mM EDTA; 0.1%TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol |
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加帽緩沖液（1X） |
50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM DTT |
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酶活定義 |
37℃條件下，1小時內(nèi)將10 pmol GTP（α-32P）摻入到一條80個核苷酸（80 nt） 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上所需要的酶量，即為1個單位。 |
產(chǎn)品應(yīng)用
1、體內(nèi)/體外翻譯前mRNA的加帽反應(yīng)。
2、mRNA的5'末端標(biāo)記反應(yīng)。
使用方法
加帽反應(yīng)
1、取10 μg RNA于1.5 mL 離心管中，用RNase Free Water稀釋至所需體積。
2、將稀釋的RNA于65℃加熱5 min使RNA變性。
3、冰上放置5 min。
4、按順序加入以下各組分
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組分 |
用量 |
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Denatured RNA |
10 μg |
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10 × Capping Buffer |
2 μL |
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GTP (10 mM) |
1 μL |
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SAM (2 mM) |
1 μL |
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Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μl) |
1 μL |
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RNase Free Water |
Up to 20 μL |
5、37℃反應(yīng)30 min，加帽反應(yīng)完成，可進行后續(xù)實驗。
注意事項
1、用于加帽反應(yīng)的RNA必須經(jīng)過純化并溶解于RNase Free Water。
2、反應(yīng)前熱處理RNA是為了打開5'末端的高級結(jié)構(gòu)，熱處理時間可根據(jù)高級結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度調(diào)整。
3、建議在反應(yīng)體系中加入1-2 μL的RNA酶抑制劑（貨號：SCB0B006），以提高反應(yīng)過程中RNA的穩(wěn)定性。
4、SAM室溫下不穩(wěn)定，降解會導(dǎo)致加帽效率變低，因此，建議將SAM放在冰上。
5、如果加帽效率低，可以延長反應(yīng)時間至1 h。
僅供科研實驗使用