細胞劃痕實驗

摘要： 在A549細胞中過表達human Oct-4-EGFP基因， 通過對Oct-4-EGFP過表達細胞組、空細胞組與陰性對照組劃痕寬度進行統計學分析，研究Oct-4-EGFP對細胞遷移能力的影響。實驗結果顯示Oct-4基因可以促進A549細胞的遷移能力。為進一步深入研究Oct-4基因的功能提供實驗數據。
關鍵詞：Oct-4-EGFP，劃痕實驗，A549

一、?實驗原理
腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力。細胞劃痕法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型，在體外培養的單層細胞上，劃痕致傷，然后比較不同實驗組中腫瘤細胞遷移的能力。

二、?實驗目的
用質粒Oct-4-EGFP轉染后的A549細胞與正常細胞組、陰性對照組進行比較分析，考察質粒Oct-4-EGFP對A549細胞的遷移能力產生的影響。

三、?實驗步驟
實驗共分以下4個主要步驟：
1.?質粒轉染細胞：
準備A549細胞，轉染前一天按照70-80%密度鋪在6cm培養皿中。16h后，按照轉染試劑說明書轉染細胞 （8μg質粒，20μl 和元生物轉染試劑）。轉染24h后，重新鋪盤，密度為30-40%。
2.?劃線：
待細胞完全貼壁后，用200μl tip輕輕劃線，垂直90度，用力均勻，確保劃線處無細胞。
3.?細胞培養及拍照：
每隔3天換一次新鮮培養基。連續幾天倒置顯微鏡下下拍照（100X），記錄細胞的遷移情況，直到細胞填滿劃痕處。
4.?統計分析：
劃線兩側間距為average gaps（AGs），使用Image-Pro Plus軟件分析各組細胞的AGs。

四、?實驗結果

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????????????????????????????????????????????????? 圖1. 過表達Oct-4對A549細胞遷移能力的影響
??從左開始依次為A549空細胞組，NC對照組（過表達EGFP），實驗組（過表達Oct-4-EGFP），每組實驗均重復3次

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?????????????????????????????????????????????? 圖2. 過表達Oct-4對A549細胞遷移能力影響的統計分析
?????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ***表示p<0.001

結論：從實驗結果以及劃痕寬度的統計分析可以發現，A549細胞在過表達Oct-4-EGFP 72h以后，遷移能力均高于空細胞組以及對照組（p<0.001）。

五、?參考文獻
1.?Liang CC, Park AY, Guan JL.In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.Nat Protoc. 2007;2(2):329-33.
2.?Glass, M; Moller, B; Zirkel, A; Wachter, K; Huttelmaier, S; Posch, S.Cell migration analysis: Segmenting scratch assay images with level sets and support vector machines.PATTERN RECOGNITION, 2012; 45 (9): 3154.

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