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β-木糖苷酶（β-xylosidase）測定試劑盒說明書
分光光度法
英文名稱：Β-xylosidase activity assay kit
關(guān)鍵詞:β-木糖苷酶|β-木糖苷酶活性檢測|β-木糖苷酶活性|木糖苷酶
貨號：BC2620 
規(guī)格：50 管/24 樣 

產(chǎn)品內(nèi)容：?
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。 
試劑一：液體 2mL×1 瓶，4℃避光保存。 
試劑二：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。 
試劑三：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。 
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1ml×1支，4℃保存，10mmol/ml對**ben酚溶液。 

產(chǎn)品說明：
?β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān) 鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造 紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價值。 β-木糖苷酶催化對**ben酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對**ben酚，對**ben酚在 405nm 處有特征吸收峰， 測定 405nm 光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。 

操作步驟：
粗酶液提取 1. 植物樣本：稱取約 0.1g 樣品，加 1.0mL 提取液充分冰浴勻漿，然后 12000rpm， 4℃，離心 20min， 棄沉淀 ，取 20μL 上清測定蛋白含量，剩余上清作為待測酶液。 2. 細(xì)菌、真菌樣本：收集約 500 萬個細(xì)胞，加入 1.0mL 提取液，超聲波破碎（冰浴，功率 300w， 超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min） ；然后 10000rpm，4℃，離心 10min，棄沉淀 ，取 20μL 上 清測定蛋白含量，剩余上清置于冰上待測。 3. 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0 mmol/ml。 
測定操作表 
 對照管 ???測定管 ????標(biāo)準(zhǔn)管 
酶液（μL）或標(biāo)準(zhǔn)液 ???200 ??????200 ???????200 
試劑一（μL） ???????????????????50 ????
試劑二（μL） ?????????400 ??????350 ????????400 ?
混勻，45℃水浴 20min ?
試劑三（μL） ?????????400???????400 ????????400 
混勻，靜置 5min， 1mL 玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定 A405。△A=A 測-A 對照

β-木糖苷酶活性計算公式 
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度（x）和濃度（y，mmol/ml）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將△A帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計算 樣品生成的產(chǎn)物量（mmol/ml）。 

按蛋白含量計算 
 酶活定義：45℃，pH7.4 時，每毫克蛋白質(zhì) 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1μmol 對**ben酚的酶量為一個酶活單 位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/mgprot）=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr 
按樣本質(zhì)量計算： 
 酶活定義：45℃，pH7.4 時，每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1μmol 對**ben酚的酶量為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/g）＝(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=0.25×y÷W 
按細(xì)胞數(shù)量計算： 
 酶活定義：45℃，pH7.4 時，每 104個細(xì)胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1μmol 對**ben酚的酶量為一個酶活單 位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/104cell）=(y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0005×y 

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；
V 樣：加入反應(yīng)體系中樣 本體積，0.2mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣本質(zhì)量，g； 
500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；
T：反應(yīng)時間，20min。 

注意事項(xiàng)：?
吸光度變化應(yīng)該控制在 0.05-0.6 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算 的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。 
 2、 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定，可選用考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測定試劑盒進(jìn)行測定。