BY4742酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

BY4742菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C，是實驗室的常用菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4742細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板板進行篩選。BY4742感受態細胞經特殊工藝制作，pYES2質粒檢測轉化效率 >10⁴ cfu/ug DNA。

2.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰.上融化的BY4742感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

3.注意事項：

1).感受態細胞最好在冰上融化, PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫下完全溶解后使用。

2).轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

3).同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4).BY4742酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃;高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。

5).菌落變粉不是污染，是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后，平板上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合 成途徑受阻;又由于其.ADE4,5, 6, 7, 8基因均正常，所以造成中間產物P-ribosylaminomidazole (AIR) 在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。

6).酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例:涂YPDA平 板29℃，48h培養可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板29℃，48- 60h培養可見直徑lmm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60- 80h培養可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培 養可見直徑lmm克隆。

*本試劑僅供實驗室研究使用