Dispase II，中文名分散酶II，一種非特異性金屬蛋白酶，細胞生物學中常用于從不同的組織或器官分離單細胞，并用于后續細胞培養，如原代細胞的分離，細胞傳代等。另外，Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養過程中發生的細胞聚集。與其他細胞生物學常用蛋白酶（如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等）相比，該酶具有以下優勢：1）一種快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；2）來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染；3）穩定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；4）可用于多種類型組織和細胞的分離等。

本品非無菌Dispase II，來源于Bacillus polymyxa，使用時需對其除菌處理，用于細胞培養時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

產品信息

使用說明

1 母液及工作液配制

1）用50 mM HEPES-KOH緩沖液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解適量本品凍干粉，配制成10 mg/mL的儲存液，用0.22 µM濾膜過濾除菌。

2）使用時用適當細胞培養液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

【注】不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。

2 組織的解離

1）用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊；

2）用無菌PBS清洗組織塊；

3）向上述組織塊中加入Dispase II溶液（工作濃度為0.6-2.4 U/mL），并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。

4）37℃孵育，孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。【注】若第一次使用該酶，可通過細胞計數來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織，1h即可達到分離目的，但更長時間（如數小時）的孵育也不會明顯影響細胞活性。

5）如有需要，可將上述消化產物通過無菌不銹鋼網篩過濾，以分開單細胞與殘留的組織塊?；蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。

6）離心沉淀細胞，倒掉酶溶液；

7）用培養基重懸細胞沉淀，并于常規條件下培養細胞。

3 細胞傳代

1）利用Dispase 溶液（37℃預熱）浸沒細胞，于37℃孵育5 min；

2）吸除上述溶液，繼續于37℃孵育10 min；

3）顯微鏡下觀察細胞分離情況，如需要，可進一步孵育15 min；

4）利用細胞培養基懸浮細胞，輕輕旋轉使得細胞沉淀并用培養基清洗細胞；

5）換用新鮮細胞培養液重懸細胞，并按常規方法進行細胞鋪板。

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凍干粉4℃保存，保質期2年。儲存液于4℃可穩定保存2周，若長期保存，請分裝后于-20℃凍存。避免反復凍融。