免疫共沉淀實驗技術（ IP ）
產品名稱： 免疫共沉淀實驗技術（ IP ）
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產品編號：
產品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
產品產地： null
品牌商標： null
更新時間： 2023-07-31T09:56:51
使用范圍： null
??免疫共沉淀實驗技術（?IP?）
IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“proreinA"特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的proreinA預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。
實驗儀器：
高速組織搗碎機：SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型號：PT1600E）
電泳儀：北京六一儀器廠（型號：DYY-8C）
電泳槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-24D）
轉印槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-40D）
低溫高速離心機：湖南湘儀公司（型號：H2050R）
超低溫冰箱：美國FORMA公司（型號：702）
分光光度計：上海分析儀器總廠（型號：721）
脫色搖床：上海琪特分析儀器有限公司（型號：STS-2）
主要試劑：
HRP標記山羊抗小鼠二抗：北京中山（貨號：ZB-2305）
蛋白質預染分子量marker：Fermentas
A蛋白-sepharose珠：Pharmacia Biotech公司產品
NC膜：Millipore公司（型號：0.45um）
化學發光底物底物：PIERCE公司
電泳類生化試劑均為美國amresco公司產品
其他生化試劑為國藥集團上?；瘜W試劑公司產品
總蛋白測定試劑盒：南京建成生物工程研究所
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操作流程
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1、樣品準備
1）取細胞加入500μl上樣Buffer(無溴酚藍)和50ul 10mg/ml PMSF，混勻，超聲波破碎細胞
2）4℃，12000rpm離心10min
3）取上清夜，-70℃凍存24hr
5）4℃ 12000rpm再次離心10min，取上清分裝，一份用于定蛋白，另一份加入溴酚藍(0.1%(W/V))后于100℃加熱4min，后于-20℃保存待用。
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2、定蛋白及計算電泳上樣量
根據總蛋白測定試劑盒說明書操作測定樣本中的總蛋白含量，電泳上樣量定為40ug
3、免疫沉淀
1）準備A蛋白-Sepharose珠：用PBS 洗兩遍珠子，然后用PBS配制成50%濃度，建議減掉槍尖部分，避免在涉及瓊脂糖珠的操作中破壞瓊脂糖珠
2）準備A蛋白-Sepharose珠.一抗復合物：按每50 μl A蛋白-Sepharose珠中加入10ul 一抗，4℃孵育1h，8000rpm離心5 min，PBS洗滌3次，加50ulPBS
3）取100 μg總蛋白，加入50ul A蛋白-Sepharose珠.一抗復合物，4℃輕搖2h，PBS洗滌3次，之后加入50ul1×SDS凝膠上樣緩沖液，100℃變性3 min，以游離抗原、抗體、珠子，8000 rpm室溫離心5 min，蛋白上清儲于-20℃備用。
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4、電泳
1）安裝好電泳裝置
2）根據不同的指標配制相應濃度的分離膠，灌膠約3/5體積，液封(<10%用0.1%SDS,>10%用異丙醇)
3）30min后，待凝后傾去封液
4）配5%的濃縮膠，灌膠至距平板頂部2mm處，插入梳子, 30min后，待凝后拔出梳子，用去離子水清洗加樣孔，用濾紙吸干
5）上樣：各樣品取50ug上樣，marker取10μl上樣(上樣前需按說明書進行預處理)
6）緩慢加入內、外槽緩沖液，接通電源，90v電泳至指示劑進入分離膠后，調電壓至150V繼續電泳
7）當指示劑距平板底端1cm處時停止電泳
5、 轉膜及檢測
1）準備2個Φ12cm的平面皿，一個裝去離子水浸泡NC膜20min，另一裝轉移緩沖液浸泡海綿和濾紙20min
2）取下膠，切除濃縮膠部分后，將分離膠浸入轉移緩沖液中約5min
3）按順序安裝好轉膜裝置（黑色板-海綿-三層濾紙-凝膠-硝酸纖維膜-三層濾紙-海綿-紅色板）
4）完全排除氣泡， 4℃，100mA轉膜2hr。
5）傾去轉膜緩沖液，拆除轉膜裝置，將硝酸纖維膜放入麗春紅中搖床染色15min，用去離子水清洗至能看到條帶，后用鉛筆標出marker位置，再用去離子水震蕩以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右
6）將膜轉移至另一容器中，用5%脫脂奶粉封閉, 4℃過夜
7）將膜轉移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的一抗
8）37℃搖床孵育約2hr
9）PBST洗滌4次，每次5min
10）將膜轉移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的二抗，37℃搖床孵育約30min
11）PBST洗滌4次，每次5min
12）將膜轉移至盡可能小的容器中并加入預先配制好的化學發光底物（A液與B液等體積混和），室溫孵育5min后
13）取出NC膜，去盡殘液，包好，放入X-光片夾中顯影
14）掃描及分析
6、 結果：
用Quantity One 4.3.1(Bio-rad)軟件對照片進行分析(注意：Trace表示 Band光密度分布曲線下面積)
威斯騰生物服務流程
威斯騰生物服務項目
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| 分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯免疫吸附法）技術 | Western-blot?實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
| 染色質免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | 科研設計指導&文章評估/潤色 |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文獻論著翻譯 |
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 論文翻譯潤色服務 |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） | 臨床實驗/科研實驗設計方案指導 | |
| 行為學檢測 | 藥物篩選服務項目 | 藥效學評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
| 重復性刻板行為檢測 | 細胞高內涵藥物篩選平臺 | 心血管系統藥物藥效學評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質組學靶標研發平臺 | 泌尿系統藥物藥效學評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內分泌系統藥物藥效學評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 | |
| 常規藥物體外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！?
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【官網網址】www.cqwestern.com
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