本試劑盒利用抗原抗體特異性結合原理開展雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），即通過向預先包被有免疫球蛋白G（IgG）抗體的微孔中，依次加入待測標本、標準品等試劑和辣根過氧化物酶（Horseradish peroxidase, HRP）標記的檢測抗體，經過孵育和洗滌后，用底物TMB顯色。TMB在HRP的催化下會變成藍色，并在酸的作用下最終變成黃色。孵育完成后，用酶標儀在450nm波長下測定溶液吸光度值（OD值），結合標準曲線計算樣品濃度。液體顏色的深淺和樣品中的目的蛋白或分子含量呈正相關。

靈敏度：0.1 g/L

特異性：本試劑盒僅識別小鼠組織標本中的IgG，與其他類似蛋白或分子無明顯交叉反應。

注意事項

1. 本試劑盒僅用于小鼠內源性IgG蛋白濃度測定，不可用于其他物種IgG含量檢測。

2. 所有試劑在使用前應平衡至室溫（20-25 ℃），使用完后立即置于2-8 ℃保存。

3. 請按照推薦的溫度和時間孵育微孔板，孵育時避免強光直接照射。

4. 操作要認真仔細，確保加入試劑體積和質量的準確性。

5. 建議將待測樣品用樣本稀釋液按一定比例（至少2倍）稀釋后再加入酶標板，以減少基質效應對檢測結果的影響。在計算樣品濃度時，乘以對應稀釋比例，即得樣品原始濃度。

6. 按本試劑盒說明書操作時，樣本已稀釋5倍，最終結果乘以5是樣本的實際濃度。

7. 洗板動作要輕柔，盡量沿孔壁加入液體，切記強力沖洗板底；同時注意吸盡殘存液體。

8. 孵育過程中注意防止微孔板液體蒸發，導致“干板”。

9. 在使用酶標儀測量前，注意徹底清除板底殘留液體、污漬和指紋，以免影響實驗結果。

10. 底物顯色液應為無色或淺色，變藍后不可用于實驗檢測。

11. 有序存放試劑和標本，避免交叉污染。

12. 不能使用過期或變質產品，不同貨號和批次產品不得混合使用。

13. 實驗剩余的板條應立即放回自封袋中，密封后低溫干燥保存。

14. 在使用本試劑盒時，請注意做好個人防護。

15. 完成檢測后，請按照廢棄試劑處理要求處置相關樣品、試劑及耗材。

樣品收集及保存方法

1. 血清：使用血清分離管收集全血標本，室溫（約25 ℃）放置2小時或4 ℃冰箱放置過夜， 3000轉離心10分鐘或1000 g離心20分鐘，取上清立即檢測，或將上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但應避免反復凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素抗凝管采集血液標本，在4 ℃條件下3000轉離心20分鐘或1000 g離心15分鐘，取上清立即檢測，或將上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿：使用預冷的PBS（pH=7.0-7.4）溶液洗滌組織，盡量洗去殘存血液（裂解的紅細胞會影響測量結果準確性），稱重后將組織剪碎，按1:9的質量體積比（即1 g組織加入9 mL溶液）加入PBS溶液（建議加入適量蛋白酶抑制劑），采用玻璃勻漿器充分研磨。后將勻漿液轉入離心管中，5000 g離心10分鐘，取上清立即檢測，或將上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但應避免反復凍融。

4. 細胞培養上清：吸取細胞培養液，1000 g離心20分鐘，取上清立即檢測，或將上清置于-20 ℃或-80 ℃冰箱保存，但應避免反復凍融。

5. 其他標本：視具體情況確定，腹腔積液、胸腔積液和關節積液等的收集和存儲方法同細胞培養上清。

6. 樣品外觀：樣品在液態時應澄清透明，處理時應盡量通過離心去除懸浮物和漂浮物。

7. 樣品保存：樣本收集后如在一周內檢測，可置于4 ℃保存；若不能及時檢測，請按一次使用量進行小份分裝，置于-20 ℃（1個月內檢測）或-80 ℃（半年內檢測）保存，避免反復凍融。