▍產品描述

膠原蛋白是結締組織和內部器官中發現的細胞外基質的主要結構成分，但在真皮、肌腱和骨骼中最普遍。它在結構上和基因上被分為許多不同的類型。I型膠原是一種異質二聚體，由兩條alpha1(I)鏈和一條alpha2(I)鏈組成，在中性pH和37℃下自發形成三螺旋支架。I型膠原是培養肝細胞、纖維母細胞、脊髓神經節、肌肉細胞、雪旺細胞、胚胎肺細胞、上皮細胞和其他細胞的優良底物。

本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿，培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞；也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環境，使細胞在三維環境中生長。

1.在使用逸漠鼠膠原蛋白 I 型包被的細胞培養皿中觀察到PC-12 細胞的貼壁和生長。

2.在 1mg/mL 濃度以上，pH 為7 左右時可形成具有一定強度的三維膠，NIH-3T3 細胞可在三維膠內正常生長、PC-12 細胞在三維膠表面正常生長。

▍產品信息

▍使用說明?

膠原蛋白 I 可凝膠到蓋玻片或組織培養皿上或用作細胞附著的薄膜涂層。細胞可在凝膠頂部，凝膠內或凝膠層之間培養。?

▍薄層包被（Thin coating）程序

通常包被濃度為 5-10 μg/cm2，推薦濃度可首選 5 μg/cm2。建議根據具體的細胞培養系統進行優化。?

1）膠原蛋白 I 用 0.02 M 乙酸稀釋配置 50 μg/ mL 工作液，膠原蛋白 I 不溶于中性 pH 溶液。?

2）以 5 μg/cm2涂布培養皿，例如：一個 35 mm 的培養皿的表面積約為 10 cm2，1~2 mL 的工作液足以覆蓋此皿。?

3）室溫孵育 1 小時。?

4）小心吸取剩余溶液，用 PBS 或無血清培養基洗滌以除去多余乙酸。?

5）組織培養皿包被后可立即使用，也可風干，在 2-8℃無菌條件下可貯存長達一周。?

▍膠凝程序?

膠原蛋白 I 按以下步驟使其 pH 達到堿性時凝膠?

1）將無菌5 cm左右的紗布海綿貼在150 mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150 mm的培養皿上，暫放置一邊。?

2）將膠原蛋白 I 均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據需要改變，膠原蛋白 I（50-100 μL）足以涂覆22 mm的蓋玻片。 對于直徑100 mm的培養皿，每個加入約6 mL；對于60 mm 培養皿添加約2.3 mL，對于35 mm培養皿添加約1 mL。?

3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。?

4）在無菌蒸餾水中（35 mm 培養皿加5 mL，60 mm 培養皿加10 mL 等）浸泡涂布的蓋玻片或培養皿30 min。吸取原蒸餾 水并加0.5-1.0 mL 無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。?

5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在 2-8°C。

▍備用膠凝程序

1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白 I、無菌 10×PBS、無菌蒸餾水、無菌 1M NaOH

2）確定膠原蛋白 I 待使用溶液所需的最終濃度的體積。

3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白 I。

4）在無菌條件下執行以下步驟。

4.1 加入 10×PBS（終體積/10）mL

4.2 計算要使用的膠原蛋白 I 的體積（不要添加到管中直到步驟 4.6 為止）

4.3 向 10×PBS 溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL 的無菌冰冷1M NaOH

4.4 向 4.3 溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：

添加蒸餾水體積=V（終）-V（膠原蛋白）-V(10× PBS）-V（1M NaOH）

4.5 混合管中的物質并放入冰中。

4.6 加入膠原蛋白 I 并計算體積，混勻，冰上備用。

5）膠原蛋白 I 溶液可立即使用或在冰上放置 2-3 小時。

6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養裝置中 37°C 凝膠 30 min。