「DIFF  CRO」登革真病毒中和抗體檢測

「DIFF  CRO」提供基于熒光斑點計數法的中和抗體檢測服務（圖1），該檢測方法靈敏度高、檢測迅速，并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。

圖1. 登革真病毒中和抗體檢測流程圖

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服務內容

針對登革病毒的蛋白酶抑制劑篩選

新型登革熱病毒蛋白酶抑制劑的發現對于抗登革熱藥物研發至關重要，在大量化合物中尋找DENV蛋白酶抑制劑的過程中，行業急需一種可實現無需活病毒參與的細胞水平的正向篩選方式。由「DIFF  CRO」開發的蛋白酶抑制劑篩選系統，可在細胞水平直接模擬病毒自然感染過程，杜絕漏篩和假陽性等情況，可在新藥發現階段快速篩選大量化合物。

1）最簡便

肉眼觀測

DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統可通過肉眼直接觀察藥物反應的熒光變化（圖2），進行定性判斷。

圖2. 以新冠陽性藥物GC376為例，添加不同濃度新冠3CL蛋白酶抑制劑后，

24h,48h,72h細胞GFP表達情況如上圖所示

2）最準確

原理可靠

本系統基于特制質粒的共表達機制，以新冠病毒為例，結合重組綠色熒光蛋白（rGFP）和冠狀病毒3CL蛋白酶。在該系統中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特異性切割位點。當3CL蛋白酶功能正常時，會特異性裂解rGFP，導致其熒光功能喪失，熒光強度減弱。相反，當抑制劑有效抑制了3CL蛋白酶的活性時，rGFP無法被切割，維持其完整性并正常發出熒光，熒光強度增強（圖3）。藥物有效性與熒光強度成正相關，是一種更直觀的正向篩選方式。

圖3. DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統原理圖

結果準確

系統實驗結果與真病毒檢測結果高度一致（圖4）。

圖4. 使用活病毒進行檢測，GC376的IC50值為4.69μM；而采用DIFF篩選系統，IC50值為6.44μM，兩種方法測得的IC50值高度相近。

圖5. 添加不同濃度新冠蛋白酶抑制劑72h后熒光檢測值

3）可進行高通量篩選

系統檢測的熒光值低而信噪比好，可聯合現有藥物庫，一周迪福即可篩選1萬-10萬個登革熱藥物候選化合物，快速鎖定有效藥物（圖6）。

圖6. 高通量篩選操作示意圖