檢測原理?:
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?????? Sequenom 公司DNA甲基化分析采用MassARRAY? EpiTYPER流程,該過程結合堿基特異性酶
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切(分子切割)和MALDI-TOF檢測原理,可實現多重CpG的分析檢測,同時具有DNA甲基化定量分析
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能力。
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試驗步驟:
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1. 將待測DNA經過亞硫酸鹽處理,DNA中未甲基化胞嘧啶(C)轉變為尿嘧啶(U),而甲基化修飾的胞
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??? 嘧啶不變;
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2. 通過PCR擴增過程引入T7-啟動子序列,經T7 DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物;
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3. 經過堿基特異性酶切處理,得到RNA小片段,并用飛行質譜檢測每個片段的分子量,最后
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??? EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。
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技術優勢:
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高靈敏度:可發現低至5%甲基化修飾,樣本起始量低至10 ng。
- 重復性好:CV≤5%。
- 高性價比:用384孔板進行 PCR 反應,一個擴增產物可以進行多重 CpG位點分析,數據無需后續驗證,可直接發表結果。
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Wang, L., et al., Relation between hypomethylation of long interspersed nucleotide elements and risk of neural tube defects. American Journal of Clinical Nutrition, 2010, 91:1359-1367.
