實驗前準備：

1.仔細閱讀使用說明書。

2.提前20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫；

3.用FITC助溶劑（DMSO，使用前需要放在室溫融化）溶解FITC。

特別提示：

A.溶解的活好FITC最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內，一周內可以使用，但是標記效率會降低；

B.FITC助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進行標記）

1.取1mg 待標記抗體于超濾管中，并加入不超過超濾管最大體積的標記緩沖液， 12,000 g 離心 10min；可以重復此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標記緩沖液調整抗體的濃度到2mg/mL左右；

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標記抗體濃度低時，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標記緩沖液反復超濾確保其去除干凈）。

2.加入溶解的FITC 50μL至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育 60min以上；

3.標記結束以后加入 1/10體積的FITC清除指示劑至上述超濾管中；

4.12,000g 離心 10min；

5.加入適量標記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min。并重復操作多次，直至超濾管中沒有藍色，未標記的FITC被徹底清除干凈；收集超濾管中的溶液，即為FITC標記抗體。

標記偶聯比率的計算:

C是某個蛋白的一個常數；

MW是蛋白的分子量；

389是FITC的分子量；

195是偶聯的FITC在490nm（PH13.0）情況下1mg/ml的吸光值；

(0.35ⅹA495)是FITC在280nm情況下吸光值的校正系數；

E0.1%是1.0 mg/ml的蛋白在280nm的吸光值。

選購之前客戶需要根據待標記物的分子量大小和標記量選擇最適宜的型號

注意事項：

1.本試劑盒適用于所有含有ε-氨基（NH2-）的大分子物質的標記，（蛋白，抗體，以及其他含有伯氨基（NH2-）的化合物分子），具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定；

2. 本試劑盒中的FITC助溶劑為DMSO ，使用完畢后要密封干燥保存；

3. 本試劑盒配備了標記物保存液，實驗人員也可以根據被標記物的特點不同，選擇更適合的保存液。

4. 本試劑盒未開封前的有效期為18個月，請在有效期內使用。

5. 本系列試劑盒提供的為超濾管分為不同的截留分子量和不同的最大容積，客戶需要根據自己要標記的物質的分子量大小和標記量選擇適合的型號；

*本試劑僅供實驗室研究使用