人EB病毒IgM(EB IgM)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中EB病毒IgM(EB IgM)水平。
實驗原理：
??本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人EB病毒IgM(EB IgM)。用純化的EB病毒IgM(EB IgM)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中人EB病毒IgM(EB IgM)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的EB病毒IgM(EB IgM)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人EB病毒IgM(EB IgM)的存在與否。
?
試劑盒組成：
試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
?
封板膜
2片（48）
2片（96）
?
密封袋
1個
1個
?
酶標包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
陰性對照
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
陽性對照
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶標試劑
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
樣品稀釋液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
濃縮洗滌液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
?
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
?
操作步驟：
1.?編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.?加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 ??
4.?配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5.?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.?加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7.?溫育：操作同3。
8.?洗滌：操作同5。
9.?顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘TUNEology 波長可調檢測卡盒-->