MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit

DNA甲基化是最早發現的基因表觀修飾方式之一，在維持正常細胞功能、遺傳印記、胚胎發育等過程中起著極其重要的作用。在正常的哺乳動物基因組中，CpG島中的CpG位點通常處于非甲基化狀態，而在CpG島外的CpG位點則通常是甲基化的。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變，從而控制基因表達。

本試劑盒利用經改造的GCM?重組MBD（methyl binding domain）蛋白對CpG甲基化位點的高親和性從基因組中快速純化CpG甲基化DN**段，每次反應可以處理1~1000ng 基因組DNA。純化后的CpG甲基化DN**段結合RT-PCR及重亞硫酸鹽處理法，可用于基因組甲基化水平分析及甲基化位點分析。同時，結合NaCl梯度洗脫，可以分離具有不同CpG甲基化密度的DN**段。

產品名稱	產品描述	產品貨號	價 格	說明書
MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit	采用MBD層析法，用于從整個基因組中快速純化富含甲基化CpG的雙鏈DN**段	MAK-GCM-30	￥3,980

工作原理：

產品特征及優點：

• 步驟簡單，反應時間短：固定化的GCM?重組MBD蛋白，無需再進行填料-MBD的固定化反應；可結合雙鏈CpG甲基化DNA，樣品基因組DNA無需變性；Elution buffer可快速洗脫產物，無需蛋白酶處理，洗脫產物可立即用于RT-PCR等下游檢測，反應耗時少于2小時
• 靈敏度高，親和力強：可處理納克級的基因組DNA；采用重組MBD蛋白，具有更高的CpG甲基化位點親和力
• 可分離具有不同甲基化程度的DNA：結合NaCl梯度洗脫，GCM?-Bead能分離具有兩個以上不同CpG位點密度的DN**段
• 更易操作：GCM?-Bead具有鮮艷的紅色，比傳統的sepharose Bead更有效地避免清洗過程中的損失

圖1. 50~0.5ng 小鼠基因組DNA 經MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit純化后，以洗脫產物為模板，對CpG陽性及陰性基因進行PCR擴增（35個循環）。GAPDH Promoter primer（negative control）PCR結果為陰性， IAP Promoter primer（positive control）PCR在小鼠基因組DNA 加入量低至1ng仍可得到陽性結果

圖2. 100ng小鼠基因組DNA與5μlGCM?-Bead室溫結合 1小時，經binding buffer 清洗4次，最后用Elution buffer 洗脫甲基化DNA。收集結合后上清物（Wash）及洗脫物（Elution）， 用小鼠β-acting Promoter primer（甲基化陰性對照）、小鼠 GAPDH Promoter primer（甲基化陰性對照）及小鼠IAP primer （甲基化陽性對照）進行PCR檢測。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer擴增帶只出現在結合后上清物中， 而IAP primer的擴增帶則出現在洗脫物中。	圖3. 左邊為sepharose，右邊為GCM?-Bead。與傳統sepharose Bead相比，GCM?-Bead更加容易辨認，在清洗過程中有效避免損失。

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