MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit

DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，在維持正常細(xì)胞功能、遺傳印記、胚胎發(fā)育等過程中起著極其重要的作用。在正常的哺乳動(dòng)物基因組中，CpG島中的CpG位點(diǎn)通常處于非甲基化狀態(tài)，而在CpG島外的CpG位點(diǎn)則通常是甲基化的。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)。

本試劑盒利用經(jīng)改造的GCM?重組MBD（methyl binding domain）蛋白對(duì)CpG甲基化位點(diǎn)的高親和性從基因組中快速純化CpG甲基化DN**段，每次反應(yīng)可以處理1~1000ng 基因組DNA。純化后的CpG甲基化DN**段結(jié)合RT-PCR及重亞硫酸鹽處理法，可用于基因組甲基化水平分析及甲基化位點(diǎn)分析。同時(shí)，結(jié)合NaCl梯度洗脫，可以分離具有不同CpG甲基化密度的DN**段。

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品描述	產(chǎn)品貨號(hào)	價(jià) 格	說明書
MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit	采用MBD層析法，用于從整個(gè)基因組中快速純化富含甲基化CpG的雙鏈DN**段	MAK-GCM-30	￥3,980

工作原理：

產(chǎn)品特征及優(yōu)點(diǎn)：

• 步驟簡單，反應(yīng)時(shí)間短：固定化的GCM?重組MBD蛋白，無需再進(jìn)行填料-MBD的固定化反應(yīng)；可結(jié)合雙鏈CpG甲基化DNA，樣品基因組DNA無需變性；Elution buffer可快速洗脫產(chǎn)物，無需蛋白酶處理，洗脫產(chǎn)物可立即用于RT-PCR等下游檢測(cè)，反應(yīng)耗時(shí)少于2小時(shí)
• 靈敏度高，親和力強(qiáng)：可處理納克級(jí)的基因組DNA；采用重組MBD蛋白，具有更高的CpG甲基化位點(diǎn)親和力
• 可分離具有不同甲基化程度的DNA：結(jié)合NaCl梯度洗脫，GCM?-Bead能分離具有兩個(gè)以上不同CpG位點(diǎn)密度的DN**段
• 更易操作：GCM?-Bead具有鮮艷的紅色，比傳統(tǒng)的sepharose Bead更有效地避免清洗過程中的損失

圖1. 50~0.5ng 小鼠基因組DNA 經(jīng)MethylAffinity? Methylated DNA Enrichment Kit純化后，以洗脫產(chǎn)物為模板，對(duì)CpG陽性及陰性基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增（35個(gè)循環(huán)）。GAPDH Promoter primer（negative control）PCR結(jié)果為陰性， IAP Promoter primer（positive control）PCR在小鼠基因組DNA 加入量低至1ng仍可得到陽性結(jié)果

圖2. 100ng小鼠基因組DNA與5μlGCM?-Bead室溫結(jié)合 1小時(shí)，經(jīng)binding buffer 清洗4次，最后用Elution buffer 洗脫甲基化DNA。收集結(jié)合后上清物（Wash）及洗脫物（Elution）， 用小鼠β-acting Promoter primer（甲基化陰性對(duì)照）、小鼠 GAPDH Promoter primer（甲基化陰性對(duì)照）及小鼠IAP primer （甲基化陽性對(duì)照）進(jìn)行PCR檢測(cè)。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer擴(kuò)增帶只出現(xiàn)在結(jié)合后上清物中， 而IAP primer的擴(kuò)增帶則出現(xiàn)在洗脫物中。	圖3. 左邊為sepharose，右邊為GCM?-Bead。與傳統(tǒng)sepharose Bead相比，GCM?-Bead更加容易辨認(rèn)，在清洗過程中有效避免損失。

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