EHA105(pSoup) 感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.? 產品簡介：

基 因 型C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine(pSoup-tetR)

EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。在EHA105菌株中轉入help質粒：pSoup即為EHA105(pSoup)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質粒在農桿菌中復制，同時賦予該菌株四環素（tet）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。EHA105(pSoup)化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301(卡那霉素抗性)質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2．混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

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*本試劑僅供實驗室研究使用